植物总酚（Total Phenols，TP）试剂盒说明书
微量法 100T/48S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
植物酚类物质具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有较的营养价值和医疗保健作用
而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。
测定原理：
在碱性条件下，酚类物质将钨钼酸还原，产生蓝色化合物，在 760nm 处有特征吸收峰，测
760nm 处的吸光值，即可得样品总酚含量。
自备实验用品及仪器：
天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计/酶标仪、
微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：60%乙醇，自备。
试剂一：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
总酚提取：
将样本烘干至恒重，粉碎，过 40 目筛之后，称取约 0.1g，加入 2.5mL 提取液，用超声提取
法进行提取，超声功率 300W，破碎 5s，间歇 8s，60℃，提取 30min。10000g，25℃，离心
10min，取上清，用提取液定容至 2.5mL，待测。
测定操作表：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 760nm，蒸馏水调零。
2、操作表
对照管 测定管
样本待测液（µL） 10 10
试剂一（µL） 50
混匀，25℃静置 2min
试剂二（µL） 50 50
H2O（µL） 140 90
混匀，25℃静置 10 min，于微量石英比色皿/96 孔板中，测定 760nm 吸光值，ΔA=A 测定-A
对照。
总酚含量计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 5.615x+0.0012，R
2 = 0.9994
总酚含量（mg/g）=（ΔA-0.0012 ）÷5.615×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）
= 8.93×（ΔA–0.0012 ）÷W
V 样总：加入提取液体积，2.5 mL； V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，
0.01mL；W：样品质量，g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 2.808x+0.0012，R
2 = 0.9994
总酚含量（mg/g）=（ΔA-0.0012 ）÷2.808×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）
= 17.86×（ΔA–0.0012 ）÷W
V 样总：加入提取液体积，2.5 mL； V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，
0.01mL；W：样品质量，g。
注意事项：
1. 吸光值大于 2，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2. 试剂一对皮肤有一定的刺激性，请操作时做好防护措施。
3. 低检出限为 2.4 μ g/g。