羟自由基清除能力测定试剂盒说明书
微量法 100T/96S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致
体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类
保健品和药品研究中得到广泛应用。
测定原理：
H2O2/ Fe2+ 通过 Fenton 反应产生羟自由基，将邻二氮菲- Fe2+水溶液中 Fe2+氧化为 Fe3+ ，导
致 536nm 吸光度下降，样品对 536nm 吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由
基的能力。
自备实验用品：
恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。
样品的制备：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2. 血清、果汁等液体样品可直接测定。
3. 提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如 5 mg/mL。
操作步骤：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 536nm，蒸馏水调零。
2、 操作表
空白管 对照管 测定管
试剂一（µL） 30 30 30
试剂二（µL） 80 80 80
试剂三（µL） 20 20 20
立即混匀，防止局部颜色过浓
样品（µL） 50
试剂四（µL） 20 20
H2O（µL） 70 50
混匀 37℃，60min，于微量石英比色皿/96 孔板中测定 536nm 处吸光值，空白管、对照管和
测定管的吸光值分别记为 A 空、A 对和 A 测。
注意：空白管和标准管只需测定一次。
计算公式:
羟自由基清除率 D% =（A 测-A 对）÷（A 空-A 对）×100%
A 空、A 对、A 测：空白管、对照管和测定管的吸光值。
注意事项:
为了比较不同样品羟自由基清除能力，对于同一批样品必须加入等量的样品，血清、组织匀
浆、果汁等液体样品加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。