植物类黄酮（Flavonoid）试剂盒说明书
微量法 100T/48S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体
内羟自由基，预防癌症等作用。
测定原理
在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在 502nm 处有特征吸收峰的红色络合物，测
定样品提取液在 502nm 处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。
自备实验用品及仪器
天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计/酶标仪、
微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液：60%乙醇，自备。
试剂一：液体 2mL×1 管，4℃保存。
试剂二：液体 2mL×1 管，4℃保存。
试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
类黄酮提取
将样本烘干至恒重，粉碎，过 40 目筛之后，称取约 0.1g，加入 2.5mL 提取液，用超声提取
法进行提取，超声功率 300W，破碎 5s，间歇 8s，60℃，提取 30min。10000g，25℃，离心
10min，取上清，用提取液定容至 2.5mL，待测。
测定操作表
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 502nm，蒸馏水调零。
2、 操作表
对照管 测定管
样本待测液（µL） 60 60
试剂一（µL） 15 15
混匀，25℃静置 5min
试剂二（µL） 15
混匀，25℃静置 5min
试剂三（µL） 120 120
60%乙醇（µL） 105 90
混匀，25℃静置 15 min，取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中测定 502nm 处吸光值。
ΔA=A 测定-A 对照。
类黄酮含量计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 6.2096x+0.0008，R
2 = 0.9996
类黄酮含量（mg/g）=（ΔA -0.0008）÷6.2096×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
= 2.013×（ΔA -0.0008）÷W
V 样总：加入提取液体积，2.5mL；V 反总：反应总体积，0.3 mL；V 样：反应中样品体积，
0.06mL； W：样品质量，g
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 3.1048x+0.0008，R
2 = 0.9996
类黄酮含量（mg/g）=（ΔA -0.0008）÷3.1048×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
= 4.026×（ΔA -0.0008）÷W
V 样总：加入提取液体积，2.5mL；V 反总：反应总体积，0.3 mL；V 样：反应中样品体积，
0.06mL；W：样品质量，g
注意事项
1、 吸光值大于 0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、 显色完成后立即测定，2 小时后吸光值会下降。
3、 低检出限为 12.8µg/g