主要用途

HEPENGBIO细菌F型ATP酶（F type ATPase）活性酶连续反应光度法定量检测试剂是一种旨在使用F型ATP酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，在寡霉素参与下，测定与ATP合成对应的ATP水解产生ADP过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后吸光峰值的降低，即采用光度法测定样品中酶活性的方法。其适合于各种细菌细胞F型ATP酶/ATP合成酶的特异性活性检测。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。

技术背景

腺苷三磷酸酶，又称为ATP酶（adenosine triphosphatase；ATPase或ATP phosphohydrolase；EC3.6.1.3），属于磷酸水解酶，可以催化含磷的酸酐分解，即催化三磷酸腺苷分解为二磷酸腺苷和无机磷。ATP酶的去磷酸化反应释放出能量，成为细胞生命代谢的能源。ATP酶为跨膜蛋白（transmembrane），帮助传输各种代谢分子进出细胞。根据ATP酶的结构和功能，分为五类不同的ATP酶，即F、V、A、P和E型。P型，又称为E1E2型，存在于细菌和真核细胞膜和细胞器上，其功能在于水解ATP获得能量，跨膜运输各种化学分子，包括Ca²⁺传输性、Na⁺-K⁺ /H⁺-K⁺传输性、H⁺传输性和所有细菌型等，其中胃氢/钾ATP酶，一种与胃酸分泌相关的质子泵，属于这一类型。V型，又称为V1V0型，主要存在于真核细胞的液泡（vacuole）中。A型，又称为A1A0型，存在于古生菌（archaea）中。E型，为细胞表面的酶。V型，又称为V1V0型，也称为氢V型ATP酶，主要存在于所有真核细胞的囊泡（vacuole或vesicle）中。F型ATP酶（F type ATPase），又称为ATP合成酶（ATP synthase）、F1F0 ATP酶（F1F0 ATPase）和线粒体呼吸链复合物V（complex V），主要在线粒体、叶绿体或细菌细胞膜上，进行氧化磷酸化或光合作用。细菌质膜型F型ATP酶主要有两个结构域：F0为质子转运通道，由3个膜蛋白构成，包括a、b、c等；和F1催化活性结构域，由水溶性的α3β3γδε蛋白构成。其最特征性的酶活性是寡霉素敏感的ATP合成酶。细菌F型ATP酶的主要功能通过ATP合成的逆向反应，水解ATP，产生膜内外质子梯度变化，帮助细菌离子转运和鞭毛运动（flagella motility）。基于ATP，在寡霉素参与下，受到F型ATP酶的水解，进而通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），产生的吸光峰值的变化（340nm），来定量分析F型ATP酶活性。其反应系统为：

F-type ATPase

ATP →ADP + Pi

pyruvate kinase

Phosphoenolpyruvate +ADP →pyruvate +ATP

lactate dehydrogenase

pyruvate+NADH→lactate +NAD⁺

（高吸收峰）（低吸收峰）