主要用途

HEPENGBIO细胞γ分泌酶（γ-SECRETASE）活性荧光共振能量转移法（FRET）定量检测试剂是一种旨在通过荧光探针NMA供体和DNP受体双重标记的多肽底物，在γ分泌酶的水解作用下，释放出强烈荧光的NMA，而发生荧光峰值的变化，即采用荧光共振能量转移法来测定样品中酶活性的方法其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或完全纯化酶样品中γ分泌酶活性的定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，安全可靠。

技术背景

γ分泌酶（γ-SECRETASE；EC3.4.24.81），是一种多亚体蛋白酶复合物（multisubunit protease complex），由4种蛋白组成：早老素蛋白（Presenilin；PS）、呆蛋白（nicastrin）、前咽缺陷蛋白-1（anteriorpharynxdefective1；APH1）和早老素增强蛋白2（presenilin enhancer 2）。其为整合性跨膜蛋白，在早期内质网里组装和成熟，后期内质网进行目标蛋白切离。γ分泌酶切离由β分泌酶切离淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein；APP）产生C99和α分泌酶切离的C83片段，前者成为具有神经毒性的40至42氨基酸长的淀粉样β-多肽（amyloid-βpeptide；Aβ），是阿茨罕默疾病（alzheimer disease；AD）的病理变化（淀粉样斑；amyloid plaque）的主要成分，由此γ分泌酶成为阿茨罕默疾病治疗的抗淀粉样多肽药物靶标。γ分泌酶与NOTCH调节有关。基于底物多肽Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala-Thr-Val（源于淀粉样淀粉样β-多肽前体蛋白序列708-715），通过荧光共振能量转移法（Fluorescence resonance energy transfer；FRET），即传递激发状态的能量由处于较短波长的供体（donor）到覆盖供体波长的受体（acceptor），使得距离依赖性反应的供体的散发光子淬灭（quench），使用2个荧光探针N-甲基氨茴酰NMA（N-Methyl-anthraniloyl）供体和二硝基苯基DNP（2,4-Dinitrophenyl）受体作为FRET对，来标记的γ分泌酶选择性多肽底物的两端，在γ分泌酶的水解作用下，在丙氨酰（alaninyl）和苏氨酰（threoninyl）残基处切离，释放出强烈荧光的NMA，在荧光分光光度仪下（激发波长340-360nm，散发波长440-450nm），来定量测定γ分泌酶的活性。其反应系统为：

γ-SECRETASE

Nma-GGVVIATVK(Dnp)RRR-NH₂→ Nma-GGVVIA+TVK(Dnp)RRR-NH₂

产品内容

HEPENGBIO清理液（Reagent A）120毫升

HEPENGBIO裂解液（Reagent B）10毫升

HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）10毫升

HEPENGBIO底物液（Reagent D）150微升

HEPENGBIO标准液（Reagent E）10微升

产品说明书1份