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Pacritinib

MCE 国际站：Pacritinib

CAS：937272-79-2

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：Pacritinib (SB1518) 是野生型 JAK2 (IC₅₀=23 nM) 和 JAK2^V617F 的有效抑制剂。 b> 突变体 (IC₅₀=19 nM)。 Pacritinib 还抑制 FLT3 (IC₅₀=22 nM) 及其突变体 FLT3^D835Y (IC₅₀=6纳米）。 IC50 和目标：IC50：6 nM (FLT3^D835Y)、22 nM (FLT3^wt)、19 nM (JAK2^V617F)、23 nM (JAK2^wt)^[1]体外： 相对于 JAK2，Pacritinib (SB1518) 是两倍对 TYK2 的效力较低 (IC₅₀=50 nM)，对 JAK3 的效力较低 23 倍 (IC₅₀=520 nM)，对 JAK1 的效力较低 56 倍 (IC ₅₀=1280 纳米）。在三磷酸腺苷浓度相当于其米氏常数 (K_m) 的情况下，针对 100 nM Pacritinib 进行测试时，其余评估的激酶表现出 <30% 的抑制作用。 Pacritinib 抑制 MV4-11 和 MOLM-13 细胞（两者都是源自 FLT3 ITD 突变驱动的人急性髓性白血病的细胞系），IC₅₀ 分别为 47 和 67 nM。 Pacritinib 抑制 Karpas 1106P 和 Ba/F3-JAK2^V617F 细胞（它们是依赖于 JAK2 信号转导的细胞系），IC₅₀ 分别为 348 和 160 nM^{[ 1]}。携带 MV4-11 细胞的 FLT3-ITD 用不同浓度的 Pacritinib (SB1518) 处理 3 小时，并量化 pFLT3、pSTAT5 和 pERK1/2 水平。 Pacritinib 导致 pFLT3、pSTAT5、pERK1/2 和 pAkt 剂量依赖性降低，IC₅₀ 分别为 80、40、33 和 29 nM。与 MV4-11 中的 FLT3-ITD 相比，RS4;11 中 FLT3-wt 自身磷酸化的 IC₅₀ 高四倍（IC₅₀=600 nM）和 MOLM-13 细胞。然而，在低得多的 Pacritinib 浓度下检测到 STAT5 抑制 (IC₅₀=8 nM)^[2]。 体内：为了评估 Ba/F3-JAK2^V617F 植入模型的疗效，小鼠接受 Pacritinib (SB1518) 治疗，剂量为50 或 150 mg/kg poqd，连续 13 天，细胞接种后 4 天开始给药。在研究结束时，载体对照小鼠表现出脾肿大和肝肿大（分别为 7 倍和 1.3 倍），让人想起在有症状的骨髓纤维化患者中发现的症状。 SB1518 以 150 mg/kg poqd 治疗显着改善所有这些症状，60% (±9%) 的脾脏重量正常化和 92% (±5%) 的肝脏重量正常化，并且耐受性良好，没有显着的体重减轻或任何血液学毒性，包括血小板减少症和贫血^[1]。在大鼠中，Pacritinib (SB1518) 表现出适度快速吸收（t_max=4 h），峰值浓度为 114 ng/mL，AUC 为 599 ng?h/mL，末端半-单次口服剂量为 10 mg/kg 后寿命约为 6 小时。在狗中，Pacritinib (SB1518) 被迅速吸收 (t_max=2.0 h)，峰浓度为 ~12 ng/mL，AUC 为 53 ng?h/mL，终末半-单次口服剂量 3 mg/kg 后寿命为 3.4 小时^[3]。

体外：相对于 JAK2，Pacritinib (SB1518) 对 TYK2 的效力低两倍 (IC₅₀=50 nM)，对 JAK3 的效力低 23 倍 (IC₅₀=520 nM) 和对 JAK1 的效力低 56 倍 (IC₅₀=1280 nM)。在三磷酸腺苷浓度相当于其米氏常数 (K_m) 的情况下，针对 100 nM Pacritinib 进行测试时，其余评估的激酶表现出 <30% 的抑制作用。 Pacritinib 抑制 MV4-11 和 MOLM-13 细胞（两者都是源自 FLT3 ITD 突变驱动的人急性髓性白血病的细胞系），IC₅₀ 分别为 47 和 67 nM。 Pacritinib 抑制 Karpas 1106P 和 Ba/F3-JAK2^V617F 细胞（它们是依赖于 JAK2 信号转导的细胞系），IC₅₀ 分别为 348 和 160 nM^{[ 1]}。携带 MV4-11 细胞的 FLT3-ITD 用不同浓度的 Pacritinib (SB1518) 处理 3 小时，并量化 pFLT3、pSTAT5 和 pERK1/2 水平。 Pacritinib 导致 pFLT3、pSTAT5、pERK1/2 和 pAkt 剂量依赖性降低，IC₅₀ 分别为 80、40、33 和 29 nM。与 MV4-11 中的 FLT3-ITD 相比，RS4;11 中 FLT3-wt 自身磷酸化的 IC₅₀ 高四倍（IC₅₀=600 nM）和 MOLM-13 细胞。然而，在低得多的 Pacritinib 浓度下检测到 STAT5 抑制 (IC₅₀=8 nM)^[2]。

体内：为了评估 Ba/F3-JAK2^V617F 植入模型的疗效，小鼠每天服用 50 或 150 mg/kg 剂量的 Pacritinib (SB1518) 13 天，第 4 天开始给药细胞接种后。在研究结束时，载体对照小鼠表现出脾肿大和肝肿大（分别为 7 倍和 1.3 倍），让人想起在有症状的骨髓纤维化患者中发现的症状。 SB1518 以 150 mg/kg poqd 治疗显着改善所有这些症状，60% (±9%) 的脾脏重量正常化和 92% (±5%) 的肝脏重量正常化，并且耐受性良好，没有显着的体重减轻或任何血液学毒性，包括血小板减少症和贫血^[1]。在大鼠中，Pacritinib (SB1518) 表现出适度快速吸收（t_max=4 h），峰值浓度为 114 ng/mL，AUC 为 599 ngh/mL，终末半-单次口服剂量为 10 mg/kg 后寿命约为 6 小时。在犬中，Pacritinib (SB1518) 被迅速吸收 (t_max=2.0 h)，峰浓度为~12 ng/mL，AUC 为 53 ngh/mL，终末半-单次口服剂量 3 mg/kg 后寿命为 3.4 小时^[3]。

激酶试验：所有测定均在 384 孔白色微量滴定板中进行。化合物（例如 Pacritinib）从 10 M 开始分 8 个步骤连续稀释 4 倍。反应混合物由 25 L 测定缓冲液（50 mM HEPES pH 7.5、10 mM MgCl2、5 mM MnCl2、1 mM DTT、0.1 mM Na3VO4、5 mM β-甘油磷酸盐）组成。对于 FLT3 检测，反应液含有 2.0 g/mL FLT3 酶、5 M 聚 (Glu,Tyr) 底物和 4 M ATP。对于 JAK1 检测，反应液含有 2.5 g/mL 的 JAK1 酶、10 M 聚（Glu、Ala、Tyr）底物和 1.0 M ATP。对于 JAK2 测定，反应液含有 0.35 g/mL 的 JAK2 酶、10 M 聚（Glu、Ala、Tyr）底物和 0.15 M ATP。对于 JAK3 检测，反应液含有 3.5 g/mL 的 JAK3 酶、10 M 聚（Glu、Ala、Tyr）底物和 6.0 M ATP。对于 TYK2 检测，反应液含有 2.5 g/mL TYK2 酶、10 M 聚（Glu、Ala、Tyr）底物和 0.15 M ATP。反应在室温下孵育 2 小时，然后添加 13 L PKLight 检测试剂。孵育 10 分钟后，在多标记读板器上读取发光信号[1]。

细胞试验：使用SET-2和Karpas 1106P细胞以及Ba/F3-JAK2V617F-GFP-Luc细胞。对于 96 孔板中的增殖测定，细胞以 30-50% 汇合度接种，并在第二天用浓度高达 10 μM 的化合物（例如 Pacritinib）（一式三份）处理 48 小时。使用 CellTiter-Glo 测定法监测细胞活力。使用 XL-fit 软件绘制剂量反应曲线以确定化合物的 IC50 值[1]。

动物体内实验:小鼠[1]使用12周龄的雌性无胸腺BALB/c裸鼠(BALB/cOlaHsd-Foxn1nu)；使用9-10周龄的雌性SCID米色小鼠(CB17.Cg-PrkdcscidLystbg/Crl)。对于SET-2白血病模型，在严重联合免疫缺陷米色小鼠的右侧皮下注射5×106个肿瘤细胞。将细胞重悬于 50 μL 无血清生长培养基中，与 Matrigel 1:1 混合，并以总体积 100 μL 注射。通过测径器测量确定肿瘤体积，并在31天后当肿瘤达到平均体积280mm 3 (肿瘤体积(mm 3 )=(w2×l)/2)时开始药物治疗。该研究每组使用 12 只小鼠，并在第 18 天给药后 3 小时处死动物。计算肿瘤生长抑制。对于功效研究，小鼠采用口服强饲法（10 mL/kg 体重），剂量为 50 至 150 mg/kg SB1518。大鼠和狗[3] 本研究使用雄性Wistar大鼠（6-8周龄，体重270至325克）和雄性Beagle犬（6至7个月大，体重9-11公斤）。狗和大鼠的口服剂量分别为3和10mg/kg。这些剂量通过管饲法以悬浮液（0.5%甲基纤维素和0.1%吐温80）的形式给大鼠施用，以明胶胶囊的形式给狗施用。口服给药后，在不同时间点（0至24小时）在含有K3EDTA作为抗凝剂的试管中收集系列血样（狗的颈静脉和大鼠的上腔静脉），并离心，分离血浆并储存在- 70°C 直至分析。血浆样品通过 LC/MS/MS 进行处理和分析。使用 WinNonlin 通过非房室方法估计药代动力学参数。

研究领域：Protein Tyrosine Kinase/RTK | JAK/STAT Signaling | Epigenetics | Stem Cell/Wnt

作用靶点：FLT3 | JAK

参考文献：

[1]. William AD, et al. Discovery of the macrocycle 11-(2-pyrrolidin-1-yl-ethoxy)-14,19-dioxa-5,7,26-triaza-tetracyclo[19.3.1.1(2,6).1(8,12)]heptacosa-1(25),2(26),3,5,8,10,12(27),16,21,23-decaene (SB1518), a potent Janus kinase 2/fms-like tyrosine kinase-3 (JA[2]. Hart S, et al. Pacritinib (SB1518), a JAK2/FLT3 inhibitor for the treatment of acute myeloid leukemia. Blood Cancer J. 2011 Nov;1(11):e44.[3]. Hart S, et al. SB1518, a novel macrocyclic pyrimidine-based JAK2 inhibitor for the treatment of myeloid ａnd lymphoid malignancies. Leukemia. 2011 Nov;25(11):1751-9.