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PF-8380

MCE 国际站：PF-8380

CAS：1144035-53-9

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：PF-8380 是一种有效的autotaxin 抑制剂，在分离酶测定中的 IC₅₀ 为 2.8 nM，在人全血中为 101 nM。 IC50 和靶标：IC50：2.8 nM（Autotaxin）^[1]体外： PF-8380 还通过 IC₅₀ 的 1.16 nM 与 FS-3 底物。当使用胎儿成纤维细胞产生的酶与溶血磷脂酰胆碱 (LPC) 作为底物结合使用时，PF-8380 的效力得以维持。在用 PF-8380 孵育 2 小时的人全血中，autotaxin 被抑制，IC₅₀ 为 101 nM^[1]。自分泌运动因子 (ATX) 是一种具有溶血磷脂酶 D (lysoPLD) 活性的酶，可催化从溶血磷脂酰胆碱 (LPC) 产生溶血磷脂酸 (LPA)。用 1 μM PF-8380 预处理 GL261 和 U87-MG 细胞，然后进行 4 Gy 照射导致克隆形成存活率降低，迁移减少（GL261 中 33%；P=0.002，U87-MG 中 P=0.002 和 17.9%；P=0.012），减少侵袭（GL261 中为 35.6%；P=0.0037，U87-MG 中为 31.8%；P=0.002），并减弱辐射诱导的 Akt 磷酸化^[2]。 体内： PF-8380 的药代动力学特征在 1 mg/kg 的静脉内剂量和 1 至 100 mg/kg 的口服剂量下评估 24 小时。 PF-8380 的平均清除率为 31 mL/min/kg，稳态分布容积为 3.2 L/kg，有效 t_1/2 为 1.2 h。口服生物利用度适中，范围从 43% 到 83%。血浆浓度随着单次口服剂量的增加而增加，但 C_max 增加的速率大约与 1 到 10 mg/kg 的剂量成正比，而不是与 10 到 100 mg/kg 的剂量成正比。按曲线下面积估计的 PF-8380 暴露与剂量大致成正比，线性高达 100 mg/kg。采集后立即测量血浆 C16:0、C18:0 和 C20:0 LPA 水平。 3 mg/kg 剂量在 0.5 小时时观察到 LPA 水平的最大降低，所有 LPA 在 24 小时时恢复到或高于基线^[1]。用 10 mg/kg PF-8380 治疗可适度增加肿瘤相关血管 20% (P=0.497)。与对照相比，在 4 Gy 照射前 45 分钟处理 PF-8380 与对照相比，血管分布减少了近 48% (P=0.031)，与单独接受辐射的小鼠相比，血管分布减少了 65% (P=0.011)^[2]。

体外：PF-8380 还抑制大鼠 autotaxin，对 FS-3 底物的 IC₅₀ 为 1.16 nM。当使用胎儿成纤维细胞产生的酶与溶血磷脂酰胆碱 (LPC) 作为底物结合使用时，PF-8380 的效力得以维持。在用 PF-8380 孵育 2 小时的人全血中，autotaxin 被抑制，IC₅₀ 为 101 nM^[1]。自分泌运动因子 (ATX) 是一种具有溶血磷脂酶 D (lysoPLD) 活性的酶，可催化从溶血磷脂酰胆碱 (LPC) 产生溶血磷脂酸 (LPA)。用 1 μM PF-8380 预处理 GL261 和 U87-MG 细胞，然后进行 4 Gy 照射导致克隆形成存活率降低，迁移减少（GL261 中 33%；P=0.002，U87-MG 中 P=0.002 和 17.9%；P=0.012），减少侵袭（GL261 中为 35.6%；P=0.0037，U87-MG 中为 31.8%；P=0.002），并减弱辐射诱导的 Akt 磷酸化^[2]。

体内：PF-8380 的药代动力学特征在 1 mg/kg 的静脉内剂量和 1 至 100 mg/kg 的口服剂量下评估 24 小时。 PF-8380 的平均清除率为 31 mL/min/kg，稳态分布容积为 3.2 L/kg，有效 t_1/2 为 1.2 h。口服生物利用度适中，范围从 43% 到 83%。血浆浓度随着单次口服剂量的增加而增加，但 C_max 增加的速率大约与 1 到 10 mg/kg 的剂量成正比，而不是与 10 到 100 mg/kg 的剂量成正比。按曲线下面积估计的 PF-8380 暴露与剂量大致成正比，线性高达 100 mg/kg。采集后立即测量血浆 C16:0、C18:0 和 C20:0 LPA 水平。 3 mg/kg 剂量在 0.5 小时时观察到 LPA 水平的最大降低，所有 LPA 在 24 小时时恢复到或高于基线^[1]。用 10 mg/kg PF-8380 治疗可适度增加肿瘤相关血管 20% (P=0.497)。与对照相比，在 4 Gy 照射前 45 分钟处理 PF-8380 与对照相比，血管分布减少了近 48% (P=0.031)，与单独接受辐射的小鼠相比，血管分布减少了 65% (P=0.011)^[2]。

激酶试验：FS-3 底物以 500 μM 溶解在测定缓冲液中，并以一次性等分试样在 -20°C 下冷冻长达 4 周。将重组自分泌运动因子在 Tris 缓冲盐水（140 mM NaCl、5 mM KCl、1 mM CaCl2、1 mM MgCl2、50 mM Tris，pH 8.0）中稀释，并与化合物在 DMSO 或单独的 DMSO（最终 1% DMSO）中孵育 15 小时。 37°C 分钟，并以终浓度 1 μM 加入 FS-3 开始反应。使反应在 37°C 下进行 30 分钟，并在 520 nm 处监测，直到与无酶对照相比，未抑制的对照给出 Z＇≥0.5。使用四参数拟合[1]一式三份测定 IC50。

细胞试验：将 HUVEC (1×106) 和 bEnd.3 细胞 (1×106) 铺在 100 mm 板中，24 小时后，将 U87-MG (2×106) 和 GL261 (2×106) 细胞铺在 Transwell 插入物上。共培养 24 小时后，用 1 μM PF-8380 或载体对照 DMSO 处理细胞 45 分钟，然后用 0、2、4、6 或 8 Gy 照射。在与 PF-8380 或 DMSO 共培养处理后，计算数量的 U87-MG 和 GL261 细胞被铺板，以实现铺板效率的标准化。孵育 7 至 10 天后，用 70% EtOH 固定平板并用 1% 亚甲蓝染色。通过在显微镜下观察培养板来对由 >50 个细胞组成的集落进行计数。存活分数计算为（集落数/铺板细胞数）/（相应对照的集落数/铺板细胞数）。通过对计算 D0 和 n[2] 的 alpha/beta 模型进行曲线拟合来分析生存曲线。

动物体内实验:大鼠[1]使用体重275至300克的雄性Lewis大鼠，并在大约1周的时间内适应其周围环境，并且随意提供食物和水。研究前至少 1 天，用异氟烷麻醉动物（以起效），并在颈动脉中植入库蚊血管导管。给药前动物在库蚊笼中适应过夜。通过使用 Culex 自动血液采样器的“tend”功能来保持颈动脉导管的通畅。禁食过夜后，动物通过口服管饲法以 1、3、10、30 和 100 mg/kg 的剂量服用 PF-8380。给药后 0.25、0.5、1、2、4、6、8 和 24 小时从颈动脉采集血液，并通过 Culex 自动血液采样器进行采集。离心血液，收集血浆用于分析PF-8380和LPA浓度。小鼠[2] GL261细胞（1×106）注射到裸鼠右后肢。一旦肿瘤可触及，小鼠就会被蛇形地分成六到七只动物的组，代表相似的肿瘤大小分布（范围= 240 mm3）。荷瘤小鼠以10mg/kg体重腹膜内注射媒介物(DMSO)或PF-8380，每天一次，连续五天。注射药物四十五分钟后，用异氟烷麻醉小鼠并将其置于 RS2000 辐照器中。然后每天用 2 Gy 照射它们，连续五天，总共照射 10 Gy。铅块（10 毫米厚）用于保护头部、胸部和腹部。使用外部可追踪数字卡尺纵向监测肿瘤大小。一旦肿瘤达到约10mm 3 的体积或当溃疡变得明显时，通过颈脱位处死小鼠。

研究领域：Metabolic Enzyme/Protease

作用靶点：Phosphodiesterase (PDE)

参考文献：

[1]. Gierse J, et al. A novel autotaxin inhibitor reduces lysophosphatidic acid levels in plasma ａnd the site of inflammation. J Pharmacol Exp Ther. 2010 Jul;334(1):310-7.[2]. Bhave SR, et al. Autotaxin Inhibition with PF-8380 Enhances the Radiosensitivity of Human ａnd Murine Glioblastoma Cell Lines. Front Oncol. 2013 Sep 17;3:236.[3]. Cao P, et al. Autocrine lysophosphatidic acid signaling activates β-catenin ａnd promotes lung allograft fibrosis. J Clin Invest. 2017 Apr 3;127(4):1517-1530.