亚铁含量(亚铁嗪比色法) 检测试剂盒说明书

(货号：HP-A217W微板法96样)

一、产品简介：

亚铁即二价铁可与亚铁嗪生成紫红色化合物，该有色物质在562nm处有特征吸收峰，进而计算得出亚铁含量。适用于检测组织、血清等样品中的亚铁含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、所需仪器和用品：

酶标仪、96孔板、可调式移液器、离心机、蒸馏水。

四、亚铁含量检测：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、样本制备：

①组织样本：

取约0. 1g组织，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆。4℃ ×12000rpm离心5min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g) ：提取液体积(mL)为1：5~ 10的比例进行提取。

② 细菌/细胞样本：

先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次)；12000rpm4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量(104) ：提取液(mL)为500~ 1000：1的比例进行提取。

③液体样本：澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。

2、上机检测：

①酶标仪预热30min，设定波长到562nm。

②所有试剂解冻至室温，在EP管中依次加入：

【注】：1. 若A测定管大于0.8，可用蒸馏水对样本上清液进行稀释，稀释倍数D代入计算公式。

2. 若A测定-A空白的差值低于0.01，可增加样本上清液体积V2 (如由120μL增至200μL或更多，则试剂一相应减少) ，标准管和空白管保持不变，则改变后的V2则带入公式重新计算。

五、结果计算：

1、按照组织质量计算：

亚铁含量(μg/g)=(C标准×V1) ×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷(V2÷V×W) ×D=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷W×D

亚铁含量(nmol/g)=(C标准×V1) ×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷(V2÷V×W) ×103÷Mr×D

=35.81×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷W×D

2、按细胞数量计算：

亚铁含量(μg/ 104cell)=(C标准×V1) ×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷(V2÷V×细胞数量) ×D=2×(A测定-A空白)÷ (A标准-A空白) ÷细胞数量

亚铁含量(nmol/104cell)=(C标准×V1) ×(A测定-A空白)÷ (A标准-A空白)÷(V2÷V×细胞数量)

×103÷Mr×D

=35.81×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷细胞数量×D

3、按照液体体积计算：

亚铁含量(μg/mL)=(C标准×V1) ×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷V2×D

=2×(A测定-A空白)÷ (A标准-A空白)×D

亚铁含量(μmol/L)=(C标准×V1) ×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷V2×103÷Mr×D=35.81×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)×D

C标准---亚铁标品浓度，2μg/mL；V2---加入样本体积，0. 12mL；W---样本取样质量，g；

Mr---亚铁分子量，55.847；

V1---加入标准品体积，0. 12mL；

V---提取液体积，1mL；

D---稀释倍数，未稀释即为1；

细胞数量---若取500万则把500代入公式计算。