果糖-1,6-二磷酸酶(Fructose 1,6-bisphosphatase，FBP)试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
果糖-1,6 二磷酸酶又称果糖 1,6 二磷酸酯酶，催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和无
机磷，在糖的异生代谢和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。
测定原理
FBP 催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和无机磷，在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异
构酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH
增加速率，即可计算 FBP 活性。
需自备的仪器和用品
分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 20mL 试剂四充分溶解待用，用不完的试剂 4℃
保存；
试剂二：液体×1 支，4℃保存；临用前加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保
存；
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂 4℃
保存；
试剂四：液体 25mL×1 瓶， 4℃保存；
样本的前处理
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提
取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、 将试剂一、二、三 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 10 分钟。
3、 加样表：
试剂名称（μL） 测定管
样本 20
试剂二 10
试剂三 10
试剂一 160
将上述试剂按顺序加入微量石英比色皿或 96 孔板中，立即混匀，加入后一个试剂的同时
开始计时，在 340 nm 波长下记录反应 1min 后吸光度 A1 和反应 6min 后的吸光度 A2，计算
ΔA=A2-A1。
FBP 活性计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(V 样×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
FBP（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321.5×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
FBP（nmol/min/104
cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.643×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4
L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103
L / mol /cm；d：
比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.02 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：
反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总
数，500 万。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(V 样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
FBP（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
FBP（nmol/min/104
cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=1.286×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4
L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103
L / mol /cm；d：
96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：
反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总
数，500 万。