BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书
微量法 100T/96S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定，蛋白浓度在
20-2000μg/ml 内。
测定意义：
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分
析。
测定原理：
碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将 Cu2+还原成 Cu+；
2 分子的 BCA 与 Cu+结合，生成紫色络合物，在 540-595nm 有吸收峰，562nm 处吸收峰
强。
自备仪器和用品：
台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、移液器和蒸
馏水。
试剂组成和配制：
试剂 A：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂 B：液体×1 支，4℃保存。
标准品：液体×1 支，4℃保存。
工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.2mL），将试剂 A 和 B 按照 50：1
的比例混合，盖紧后充分混匀。
样品中可溶性蛋白质提取：
1. 液体样品：澄清液体样品可以直接测定。
2. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g
组织，加入 1mL 提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水））
冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。（动物样品常常需要稀释）
3. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议
500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，
总时间 3min）；然后 10000rpm，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
测定操作：
1. 可见分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 562 nm，蒸馏水调零。
2. 工作液置于 60℃水浴预热 30 min。
空白管 标准管 测定管
蒸馏水（μL） 4
标准品（μL） 4
待测液（μL） 4
工作液（μL） 200 200 200
混匀后置于 60℃保温 30min，于微量玻璃比色皿/96 孔板，于 562nm 处测定吸光值 A，分别记
为 A 空白管、A 标准管、A 测定管。
注意：空白管和标准管只需要做一次。
计算公式：
Cpr (mg/mL)= C 标准品×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）
=0.5×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）

注意事项：
1.BCA 法蛋白含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在 20-2000μg/ml 样品。测定前取 1-2
个样做预实验，样品蛋白含量太的话，请稀释至相应浓度范围内，以测定的准确性。
2.待测样品蛋白提取可用生理盐水、蒸馏水或 PBS 提取。
3.由于受测定温度及时间等的影响，请严格按照给定条件测定。