一、产品简介

罗丹明123（Rhodamine 123）是一种可透过细胞膜的阳离子荧光染料，是一种线粒体跨膜电位的指示剂。其在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质，荧光强度减弱或消失。而在凋亡发生时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位（ΔΨm） 的崩溃，Rh123 重新释放出线粒体, 从而发出强黄绿色荧光，可用荧光显微镜、荧光光度计或流式细胞仪检测，通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化和凋亡的发生。

本试剂盒适用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。

二、试剂盒组份

罗丹明123染液浓度为1mg/ml。

三、试剂盒以外自备仪器和试剂

荧光显微镜或流式细胞仪、低速离心机、微量移液器、1.5m L离心管、、盖玻片、线粒体提取试剂试剂盒

四、保存条件：

-20℃保存，罗丹明123染液需避光保存。

五、注意事项：

1、荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

六、操作规程

1、反应工作液的配制：

使用前，取试验盒中5×反应液用双蒸水稀释5倍得反应工作液。

2、细胞染色及分析

a、按照常规的方法离心（2000rpm，5min）收集细胞1×106，重悬1.0ml培养基中。

b、加入罗丹明123染液0.1μg/mL～50 μg/mL （根椐细胞种类不同而浓度不同，一般3～10 μg/mL）。

c、37℃，5% CO2细胞培养箱孵育1～30 min（根椐细胞种类不同而不同，一般10 min）。

d、离心（2000rpm，5min）以培养基洗细胞两次。

e、重悬细胞于1.0ml培养基中，37℃，5% CO2培养60 min。

f、流式细胞仪检测：激发波长488～505nm，发射波长515～575 nm （一般为530nm）。

g、荧光显微镜观察：滴加100μL上述混合液于载玻片上，激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515nm观察，拍照。

3、组织提取的线粒体染色及分析

a、按常规方法提取的线粒体，用适量的反应工作液重悬细胞。

b、常规方法进行蛋白含量测定后，用反应工作液调配成3mg/mL的线粒体溶液。

c、取2mL 反应工作液和1mL线粒体溶液。

d、加入适量待测化合物（同时设空白对照组），250C保温3 min。

e、加入罗丹明123染液10μL。

f、荧光光度计检测：上述混合液全部加入石英比色皿中，置于250C下测定，激发波长488～505nm，发射波长530nm，连续记录从0 min～30 min内荧光强度的变化。