10491 v.A
干细胞软骨细胞分化潜力比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
干细胞软骨细胞分化潜力比色法定量检测试剂是一种旨在通过使用阳离子染料阿尔新蓝，使软骨组织上蛋
白多糖聚糖染色，呈现深蓝色，在分光光度仪上进行比色测定，以分析软骨细胞分化和软骨组织形成程度
的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物干细胞的软
骨细胞分化程度分析。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，着色清晰。
技术背景
间质干细胞（mesenchymal stem cell）分化产生脂肪细胞（adipocyte）、成骨细胞（osteoblast）、肌细胞（myocyte
和软骨细胞（chondrocyte）。软骨细胞及其细胞外基质（extracellular matrix）构成软骨组织（cartilage tissue），
其含有硫酸软骨素（chondroitin sulfate）和硫酸角质素（karatan sulfate）等为主要成分的蛋白多糖
（proteoglycan）聚糖（aggrecan），成为软骨生成（chondrogenesis）的标记（indicator）。阿尔新蓝（alcian blue）
是一种阳离子含铜染料，使酸性粘多糖（mucopolysaccharide）类蛋白聚糖染色，呈现深蓝色。在分光光度
仪或酶标仪上（490nm波长）进行测定，来定量分析软骨细胞分化和软骨组织形成的程度。
产品内容
清理液（Reagent A） 20 毫升
固着液（Reagent B） 20 毫升
净化液（Reagent C） 20 毫升
染色液（Reagent D） 10 毫升
溶解液（Reagent E） 5 毫升
产品说明书1 份
保存方式
保存染色液（Reagent D）在4℃冰箱里，其余的保存在室温下；确保瓶盖密闭。染色液（Reagent D），避
免光照；有效保证6 月
用户自备
显微镜：用于观察软骨细胞染色情况
平式摇荡仪：用于染色萃取的混匀
比色皿或多孔板：用于比色分析的容器
分光光度仪或酶标仪：用于定量检测软骨细胞
实验步骤
1． 小心抽掉多孔细胞培养板里的培养液
2． 轻轻加入适量的清理液（Reagent A）到每个培养孔里（见下表）
3． 小心抽去清理液
4． 小心加入适量的-20℃预冷的固着液（Reagent B）到每个培养孔里（见实验步骤2 表）
5． 在-20℃冰箱里孵育60 分钟
6． 小心抽去固着液
7． 小心加入适量的净化液（Reagent C）到每个培养孔里（见实验步骤2 表）
8． 小心抽去净化液
9． 小心加入适量的染色液（Reagent D）到每个培养孔里（见下表）
10．在室温下静置15 分钟
11．小心抽去染色液
12．小心加入适量的净化液（Reagent C）到每个培养孔里（见实验步骤2 表）
13．小心抽去净化液
14．重复实验步骤12 和13 二次，或净化液不再显示蓝色
15．（选择步骤）置于一般光学显微镜下观察染色情况：软骨细胞呈现深蓝色
16．小心加入适量的溶解液（Reagent E）（见下表）
17．轻轻摇动培养板，直到溶解液（Reagent E）均匀分布
18．置于平式摇荡仪，在室温下，孵育30 分钟，速度为50RPM
19．（选择步骤）移入到比色皿
20．即刻放进分光光度仪或酶标仪测读，波长为490 nm
21．构建软骨细胞定量曲线：横座标（x 轴）为细胞浓度（细胞量）；纵坐标（y 轴）为样品读数（吸光单
位OD 值）
注意事项
1． 本产品为20 次（24 孔板）、50 次（48 孔板）、100 次（96 孔板）操作
2． 操作时须戴手套
3． 试剂瓶务必密封保存
4． 染色时，避免光照
5． 细胞染色前后的清洗过程中，小心操作，以免将细胞冲洗掉，而影响定量分析
6． 本公司提供系列干细胞分化检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定着色清晰
版权声明