一、实验目的

厌氧微生物对氧气敏感，常规厌氧袋、厌氧罐方式容易出现氧浓度波动、中途开盖失氧，造成厌氧菌无法生长、实验失败。OxyA-6450 厌氧工作站可在密闭腔体内部维持稳定低氧厌氧环境，样品接种、划线分离、菌落培养全程在无氧环境内完成，避免样品接触空气导致菌株失活，提升厌氧菌检出率，为环境监测实验室厌氧微生物分离鉴定提供稳定可控的厌氧培养方案。

二、实验步骤

（一）仪器与试剂耗材

仪器：厌氧工作站 OxyA-6450（内置钯催化除氧、紫外灭菌、温湿度控制，氧浓度可稳定≤5ppm，控温范围 RT+3~52℃） 配套设备：高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、移液枪 耗材：厌氧培养皿、接种环、无菌离心管、气体钢瓶（氮气、氢气、二氧化碳混合气） 试剂：预还原厌氧培养基、无菌稀释液、厌氧指示剂

（二）样品前处理

水样、污泥样品按照标准要求进行梯度稀释，使用预还原稀释液制备样品悬液，全程尽量减少与空气接触。

（三）设备参数设置

1. 开启工作站，启动气体置换、催化除氧程序，待腔体内氧浓度、温度稳定至设定值；

2. 腔体设置培养温度 37℃，调节混合气配比，确认厌氧指示剂颜色达标；

3. 样品、培养基通过传递舱送入腔体内部，完成舱内换气。

（四）接种与恒温培养

在工作站内部完成样品涂布、划线接种，将平板放置于腔内搁板，关闭舱门，恒温厌氧培养；产气荚膜梭菌培养 24h，硫酸盐还原菌、厌氧异养菌按标准要求培养 48~72h。培养结束后，在腔体内完成菌落观察、挑取纯化。

三、注意事项

• 定期检查钯催化剂活性，失效后及时更换，保证除氧效果；

• 传递舱进出样品时严格执行换气流程，防止外界氧气大量进入主腔体；

• 培养基提前预还原，减少培养基内部溶解氧对厌氧菌的抑制；

• 腔体定期紫外灭菌，做好内部清洁，防止不同样品之间交叉污染；

• 实时关注气瓶压力，避免供气中断造成厌氧环境失效。

四、实验结论

OxyA-6450 厌氧工作站可长期维持稳定的无氧培养环境，接种、分离、培养一体化操作，相比传统厌氧罐、厌氧袋，氧浓度可控性更强，有效避免厌氧菌接触氧气失活，提升厌氧微生物检出稳定性，适合环境水样、污泥沉积物中各类厌氧菌的分离培养与鉴定。