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Lumacaftor | 鲁玛卡托

MCE 国际站：Lumacaftor

中文名：鲁玛卡托

CAS：936727-05-8

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：Lumacaftor (VX-809; VRT 826809) 是一种 CFTR 调节剂，可纠正 CFTR 蛋白的折叠和运输。 IC50 和目标：EC50：0.1 μM (CFTR)^[1]体外： 在 fischer 大鼠甲状腺 (FRT) 细胞中，Lumacaftor 改善 F508del -与载体处理的细胞（EC₅₀，0.1±0.1 μM；n=3）相比，CFTR 成熟 7.1±0.3 倍 (n=3)，并将 F508del-CFTR 介导的氯化物转运增强约五倍 (EC₅₀, 0.5±0.1 μM; n=3)。在 Lumacaftor 浓度大于 10 μM 时，响应降低，导致钟形剂量-响应关系，IC₅₀ 约为 100 μM。 Lumacaftor 在大鼠体内具有口服生物利用度，体内血浆水平显着高于体外疗效所需的浓度^[1]。在两种细胞系中，Lumacaftor 在 37°C 或 27°C 下与细胞孵育后，HRP 发光信号产生浓度依赖性增加，EC₅₀ 值相似，约为 0.3 μM。在 37°C 的 F508-HRP CFBE41o^- 细胞中，Lumacaftor 将信号最大程度地增加到大约 250 个发光任意单位 (au)，超过约 60 au 的 DMSO 控制基线，代表大约 4 倍的信号增加。类似地，对于 R1070W-HRP CFBE41o^- 细胞，Lumacaftor 将信号最大程度地增加到约 220 au，超过 DMSO 控制基线约 85 au，表示信号增加约 2.5 倍。因此，这两种细胞系都产生了具有良好动态范围的稳健信号，可用于高通量筛选^[2]。体内雄性 Sprague-Dawley 大鼠口服 1 mg/kg Lumacaftor 导致 C_max 为 2.4±1.3 μM，t _1/2 of 7.7±0.4 h（平均值±SD；n=3），表明 Lumacaftor 具有口服生物利用度并且能够达到显着超过 EC₅₀ 的血浆水平s 用于 F508del-CFTR 校正^[1]。

体外：在 fischer 大鼠甲状腺 (FRT) 细胞中，与载体处理的细胞（EC₅₀，0.1±0.1 μM；n=3）相比，Lumacaftor 使 F508del-CFTR 成熟提高 7.1±0.3 倍 (n=3) ) 并将 F508del-CFTR 介导的氯离子转运增强大约五倍 (EC₅₀, 0.5±0.1 μM；n=3)。在 Lumacaftor 浓度大于 10 μM 时，响应降低，导致钟形剂量-响应关系，IC₅₀ 约为 100 μM。 Lumacaftor 在大鼠体内具有口服生物利用度，体内血浆水平显着高于体外疗效所需的浓度^[1]。在两种细胞系中，Lumacaftor 在 37°C 或 27°C 下与细胞孵育后，HRP 发光信号产生浓度依赖性增加，EC₅₀ 值相似，约为 0.3 M。在 37°C 的 F508-HRP CFBE41o^- 细胞中，Lumacaftor 将信号最大程度地增加到大约 250 个发光任意单位 (au)，超过约 60 au 的 DMSO 控制基线，代表大约 4 倍的信号增加。类似地，对于 R1070W-HRP CFBE41o^- 细胞，Lumacaftor 将信号最大程度地增加到约 220 au，超过 DMSO 控制基线约 85 au，表示信号增加约 2.5 倍。因此，这两种细胞系都产生了具有良好动态范围的稳健信号，可用于高通量筛选^[2]。

体内：在雄性 Sprague-Dawley 大鼠中口服给予 1 mg/kg Lumacaftor 导致 C_max 为 2.4±1.3 μM，t_1/2 为 7.7±0.4 h（平均值±SD；n=3)，表明 Lumacaftor 具有口服生物利用度，并且能够达到显着超过 F508del-CFTR 校正^[1]EC₅₀s 的血浆水平。

激酶试验：使用 Beckman Coulter Biomek FX 平台进行筛选。在一组测定中，将表达 R1070W-F508-CFTR-HRP (R1070W-HRP) 的 CFBE41o- 细胞与含有 25 M 测试化合物和 0.5 g/mL 多西环素的 100 L 培养基在 37°C 下孵育 24 小时。在第二组测定中，将表达 F508-CFTR-HRP (F508-HRP) 的 CFBE41o- 细胞与含有 25 M 测试化合物、2 M Lumacaftor 和 0.5 g/mL 多西环素的 100 L 培养基在 37° 下孵育 24 小时C。所有化合物板均包含阴性对照 (DMSO) 和阳性对照 (2 M Lumacaftor)。在这两种测定中，细胞均用 PBS 洗涤四次，并通过添加 50 L/孔的 HRP 底物来测定 HRP 活性。摇动 5 分钟后，使用配备自动堆叠器的 Tecan Infinite M1000 读板仪测量化学发光（积分时间，100 毫秒）[2]。

细胞试验：表达 F508-CFTR YFP 的 A549 细胞在铺板后在 37°C/5% CO2 下生长 18-24 小时。然后将细胞与100μL含有测试化合物的培养基一起孵育18-24小时。测定时，用 PBS 洗涤细胞，然后与含有毛喉素 (20 μM) 和染料木黄酮 (50 μM) 的 PBS 孵育 10 分钟。通过连续记录荧光（每点 200 毫秒）2 秒（基线），然后快速添加 165 μL PBS（其中 137 mM Cl- 被 I- 取代）后记录 12 秒，单独测定每个孔的 I- 流入量。初始 I 流入速率是通过将最后 11.5 秒的数据拟合为初始斜率外推的指数来计算的，该指数针对扣除背景的初始荧光进行了标准化。所有化合物板均包含阴性对照（DMSO 载体）和阳性对照（5 M Lumacaftor）。使用配备双注射泵（激发/发射 500/535 nm）的 Tecan Infinite M1000 读板仪测量荧光[2]。

动物体内实验:大鼠[1] 雄性大鼠（每个剂量组n=3）以5 mL/kg的剂量体积口服施用在由0.5% Tween80/0.5%甲基纤维素/水组成的载体中的Lumacaftor。血浆样品中 Lumacaftor 的浓度用液相色谱/串联 MS 方法测定。采用WinNonlin专业版软件计算药代动力学参数。

研究领域：Membrane Transporter/Ion Channel | Autophagy

作用靶点：CFTR | Autophagy

参考文献：

[1]. Van Goor F, et al. Correction of the F508del-CFTR protein processing defect in vitro by the investigational drug VX-809. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011 Nov 15;108(46):18843-8.[2]. Phuan PW, et al. Synergy-based small-molecule screen using a human lung epithelial cell line yields ΔF508-CFTR correctors that augment VX-809 maximal efficacy. Mol Pharmacol. 2014 Jul;86(1):42-51.