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PRT062607 (Hydrochloride)

MCE 国际站：PRT062607 (Hydrochloride)

CAS：1370261-97-4

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：4°C, sealed storage, away from moisture

生物活性：PRT062607 Hydrochloride (P505-15 Hydrochloride) 是一种高度特异性且有效的纯化 Syk 抑制剂 (IC₅₀ 1-2 nM)。 IC50 和目标：IC50：1 nM (Syk)、81 nM (Fgr)、88 nM (MLK1)、123 nM（是）^[1]体外： PRT062607 (P505-15) 是一种新型、高度特异性且有效的口服 Syk 小分子抑制剂。 PRT062607 对其靶激酶 Syk 的效力最初在两种不同的纯化激酶测定中进行了测试。使用 FRET 测定，半数最大 Syk 抑制需要 6±0.2 nM（平均值±SEM）。在放射性酶测定中观察到类似的效力，所得 Syk IC₅₀ 为 2.1±0.4 nM（平均值±SEM）。在人全血中，PRT062607 有效抑制 B 细胞抗原受体介导的 B 细胞信号传导和激活（IC₅₀ 分别为 0.27 和 0.28 μM）和 Fcε 受体 1 介导的嗜碱性粒细胞脱颗粒（IC₅₀ 0.15 μM)^[1]。 体内：在小鼠 CAIA 模型中，口服 PRT062607 (P505-15) 可平均抑制爪子炎症，这是通过每日炎症评分与载体对照分别为 12%、44% 和 87%，研究结束时评估的平均血浆浓度（24 小时内的 C 平均值）分别为 0.38、0.95 和 1.47 μM。在用 30 mg/kg PRT062607 处理的小鼠中，关节损伤显着减少，似乎与正常小鼠没有区别。在大鼠 CIA 模型中，到研究结束时，高剂量的 PRT062607（15 mg/kg bid）完全抑制了大多数动物（八只中的七只）的炎症（平均炎症评分±SEM=0.63±1.1； p<0.0001 对比载体）^[1]。

体外：PRT062607 (P505-15) 是一种新型、高度特异性且有效的口服 Syk 小分子抑制剂。 PRT062607 对其靶激酶 Syk 的效力最初在两种不同的纯化激酶测定中进行了测试。使用 FRET 测定，半数最大 Syk 抑制需要 6±0.2 nM（平均值±SEM）。在放射性酶测定中观察到类似的效力，所得 Syk IC₅₀ 为 2.1±0.4 nM（平均值±SEM）。在人全血中，PRT062607 有效抑制 B 细胞抗原受体介导的 B 细胞信号传导和激活（IC₅₀ 分别为 0.27 和 0.28 μM）和 Fcε 受体 1 介导的嗜碱性粒细胞脱颗粒（IC₅₀ 0.15 μM)^[1]。

体内：在小鼠 CAIA 模型中，口服 PRT062607 (P505-15) 导致足部炎症的平均抑制，通过每日炎症评分与载体对照相比，平均血浆浓度为 12%、44% 和 87% (C平均超过 24 小时）在研究结束时评估分别为 0.38、0.95 和 1.47 μM。在用 30 mg/kg PRT062607 处理的小鼠中，关节损伤显着减少，似乎与正常小鼠没有区别。在大鼠 CIA 模型中，到研究结束时，高剂量的 PRT062607（15 mg/kg bid）完全抑制了大多数动物（八只中的七只）的炎症（平均炎症评分±SEM=0.63±1.1； p<0.0001 对比载体）^[1]。

激酶试验：Syk 抑制效力通过荧光共振能量转移 (FRET) 测定来确定。 Syk 的底物磷酸化程度是在各种 PRT062607 (P505-15) 浓度存在下测量的。 Syk 活性由磷酸化酪氨酸特异性荧光抗体通过 FRET 的增加来测定。测试十二个浓度的剂量反应。激酶抑制的特异性和效力是通过在包含 270 个独立纯化激酶测定的激酶分析器面板中评估 PRT062607 来确定的。为了进行分析，PRT062607 在固定浓度的 ATP 下以两个浓度进行重复测试。随后，使用放射性测定法在针对每种激酶优化的 ATP 浓度下进行 IC50 测定。进行所有放射性 ATP 掺入酶测定
[1]。

细胞试验：用 F(ab)＇2 抗人 IgM 抗体刺激 SUDHL4 细胞（106 个细胞）30 分钟。通过将细胞重悬于含有新添加的蛋白酶和磷酸酶抑制剂片剂的冰冷裂解缓冲液（50 mM Tris、pH 7.4、150 mM NaCl、0.5 mM EDTA、1% nonidet P-40 和 0.5% 脱氧胆酸钠）中来终止信号传导。在还原条件下通过 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳解析蛋白质裂解物，并用指定的抗体进行探测。使用辣根过氧化物酶缀合的二抗和增强化学发光检测试剂来检测特定蛋白质。根据指示，在刺激前用 PRT062607 或载体对照在 37°C 下将细胞预处理 1 小时。使用 AlphaImager 2200 进行曝光胶片的光密度测定。将 Ba/F3 细胞以每孔 5000 个细胞接种到含有不同浓度 PRT062607 或十字孢菌素培养基的 384 孔组织培养板中。 3 天后，细胞活力通过 CellTiter Glo 按照制造商提供的方案进行定量
[1]。

动物体内实验:小鼠
[1] 雌性 BALB/c 小鼠接受单次口服剂量 15 或 30 mg/kg PRT062607，并用皮下氯胺酮混合物麻醉，并在 0.5、1、2、3、4、5 时通过心脏穿刺采集血液、给药后 6、8 和 24 小时（n=3/时间点；n=8 载体对照）。将血液分配到三个含有肝素的试管中，其中一个用于测定药物浓度，其余两个用于用同种型对照或抗小鼠 IgD 抗体进行离体刺激 10 分钟。如前所述，对血液进行细胞内磷酸流式细胞术处理，以评估 BCR 信号传导；使用 CD45R-B220 PerCP 偶联抗体检测小鼠 B 细胞。使用液相色谱串联质谱仪分析血浆样品的 PRT062607 浓度。分析范围为 2 至 5000 ng/mL。大鼠
[1] 通过在尾部基部皮下注射用不完全弗氏佐剂乳化的牛胶原II，在雌性7周大Lewis大鼠中诱导胶原诱导的关节炎(CIA)。第10天，对大鼠进行第二次皮下注射加强免疫。当至少一只后爪发炎（炎症评分 1）时开始 PRT062607 给药，并且将每只动物单独纳入治疗组指定为研究的第 1 天（n = 8/剂量组）。疾病进展表现为一侧或双侧踝关节水肿和红斑加重，随后累及跖骨和指间关节。炎症发作后约 4 至 7 天观察到完全发展的关节炎。每天对后爪（两只爪子的总和）进行评分以了解炎症进展。每只爪子的炎症评分根据以下等级确定：0，正常；0，正常； 1、脚踝轻微但明显的红肿，可能仅限于个别手指； 2、脚踝中度红肿； 3、整个爪子包括手指头严重红肿； 4，肢体发炎最严重，累及多个关节。脚踝厚度测量是通过卡尺装置获得的。研究结束时，将大鼠麻醉，并通过心脏穿刺采集血液用于全血细胞计数和药物血浆浓度。

研究领域：Protein Tyrosine Kinase/RTK

作用靶点：Syk

参考文献：
[1]. Coffey G, et al. Specific inhibition of spleen tyrosine kinase suppresses leukocyte immune function ａnd inflammation in animal models of rheumatoid arthritis. J Pharmacol Exp Ther. 2012 Feb;340(2):350-9.