总巯基测定试剂盒说明书
微量法 100T/48S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，
而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和 GSH
含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。
测定原理：
巯基基团与 5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有
大吸收峰。
自备实验用品：
天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 1 mL×1 管，4℃避光保存。
样品的制备：
1. 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入
1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2. 血清，培养液：直接测定。
操作步骤：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。
2、操作表
对照管 测定管
样品（μL） 40 40
试剂一（μL） 150 150
试剂二（μL） 10
H2O（μL） 10
混匀，25℃静置 10min，于微量石英比色皿/96 孔板，测定 412nm 吸光值。ΔA=A 测定-A 对
照。
计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
总巯基标准曲线：y = 1.7236 x，R
2 = 0.9994
1. 组织：
（1）按样本重量计算
总巯基含量（μmol/g）=
1.7236
A
×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）= 2.9×ΔA÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
总巯基含量（μmol/mg prot）=
1.7236
A
×V 反总÷(V 样×Cpr) = 2.9×ΔA÷Cpr
2. 血清、培养液：
总巯基含量（μmol/L）=
1.7236
A
×V 反总÷V 样×103
=2900×ΔA
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，
1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；103 ：1mmol/L=103
μmol/ L
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
总巯基标准曲线：y = 0.8618x，R
2 = 0.9994
1. 组织：
（1）按样本重量计算
总巯基含量（μmol/g）=
0.8618
A
×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）=5.8×ΔA÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
总巯基含量（μmol/mg prot）=
0.8618
A
×V 反总÷（V 样×Cpr）=5.8×ΔA÷Cpr

2. 血清、培养液：
总巯基含量（μmol/L）=
0.8618
A
×V 反总÷V 样×103
=5800×ΔA
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，
1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；103 ：1mmol/ L=103
μmol/ L
注意事项
低检出限为 10μ mol/