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海量PCR片段纯化试剂盒

提供者:上海雅吉生物科技有限公司   发布时间:2019/5/8 10:26:13  阅读次数:2908次  进入该公司店铺

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周*
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产品及特点
本试剂盒可用于海量PCR产物回收。在大规模制备PCR产物时(如DNA
Marker的制备),往往需要回收毫克级的PCR片段,如果使用传统的大提柱式法,
由于需要加3倍体积的上柱液,一次纯化实际处理量只有5-6 mL PCR反应液。此
外,由于需要多次(一般需要4-6次)洗脱才能将PCR片段全部从离心吸附柱上回
收,得到的PCR片段浓度很难控制(一般都较稀)。为解决上述问题,本公司特开
发出本产品,其流程如下:
它具有下列提点:
1. 海量处理。本试剂盒一次可以从40 mL的PCR反应液中纯化到毫克级的PCR片
段,是一般大提离心吸附柱的7-8倍(一次只能纯化6 mL)。
2. 快速。一次操作只需十分钟左右,时间是大提柱式法的1/3左右。
3. 回收的DNA高度浓缩,方便后续使用。由于得到的是DNA沉淀,可以溶解在
任何体积的溶液中,而柱式法需要反复洗脱才能得到全部DNA,很难控制最后
DNA的终浓度。
4. 回收效率高达90%,但片段长度不能低于100 bp。
5. 纯度高。回收的DNA可直接用于电泳、酶切、连接等多种分子生物学实验。
6. 非常容易放量或减量操作。因为是沉淀法,最大处理量由离心管的大小决定,
比使用离心吸附柱(最大处理量固定)更加方便。
使用及效果
在PCR反应产物中,加入0.1倍体积的溶液A,摇晃混匀后室温放置5分钟,
10000 g离心10分钟,弃上清,加入跟PCR溶液等体积的溶液B,摇晃混匀后
10000 g离心两分钟,所得沉淀即为回收的PCR片段,溶于适量溶液即可。
一次纯化800 μg PCR产物效果图
图注:左一为100 bp DNA Ladder。
左二是用本产品纯化25 mL PCR反应
液得到的长为250 bp的DNA产物,
DNA最后溶于2 mL TE中,DNA总量
为800 μg,此处上样量为5 μL。左三
是左二沉淀的上清用乙醇沉淀法回收
DNA后沉淀全部上样,没有DNA条带
说明本法沉淀回收DNA彻底。电泳染
料为本公司绿如蓝染料(实验编号:
304270)。

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