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无内毒素质粒提取试剂盒(5~15mL)
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详细内容
中文名称:无内毒素质粒提取试剂盒(5~15mL)
英文名称:EndoFree Mini Plasmid DNA Kit II(5-15mL)
产品规格:50次
产品货号:GOY-F9799
| 产品特点: 快速高产:1h左右提取5~70μg质粒。 质粒纯度高:特殊的去内毒素体系配合CP4吸附柱特异吸附核酸,内毒素含量低。 应用广泛:适用于酶切、PCR、测序、连接、转化等常规实验及基因治疗、细胞显微注射、基因沉默、转染等高端实验。 保存条件: 室温(15~25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2~8℃。(注意:当低温贮存时,使用应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min,以平衡溶液温度)。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月以上。加入RNase A后的溶液P1应置于2~8℃保存,可稳定保存6个月。 注意事项:(请务必在使用本试剂盒之阅读此注意事项) 溶液P1在使用先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A全部加入),混匀,置于2~8℃保存。 第yi次使用应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液PW中加入无水乙醇。 使用先检查平衡液BL、溶液P2和P4是否出现浑浊,如有混浊现象,可在37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。 注意不要直接接触溶液P2和P4,使用后应立即盖紧盖子。 所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心,速度为12000rpm (~13400×g)。 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加P1、P2、P4的用量,洗脱缓冲液应在65~70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间,以增加提取效率。 实验使用平衡液处理吸附柱,可以大限度激活硅基质膜,提高得率。 用平衡液处理过的柱子好当天使用,放置时间过长会影响效果。 |
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
热休克蛋白β2(HSPβ2)酶联免疫试剂盒靛蓝 CP,85%新绿原酸 分析标准品,≥99%正(标准品)
无内毒素质粒提取试剂盒(5~15mL)N-(2,6-Dimethylphenyl)-2-piperidinecarboxamide
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