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上海谷研实业有限公司 主营产品:lisa试剂盒/菌种/ATCC细胞/生化试剂/标准品

第10年

当前位置: 阿仪网 > 生物试剂/抗体/细胞 > 生物制剂 > 其他 > 上海谷研实业有限公司 > 产品展示 > 分子试剂 > DNA提取纯化 > 革兰氏阳性菌质粒提取试剂盒(1~4mL)

革兰氏阳性菌质粒提取试剂盒(1~4mL)

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title型号: 原产地:中国大陆 更新时间:2026/10/22 10:51:40

产品摘要:革兰氏阳性菌质粒提取试剂盒(1~4mL)正在出售的产品:钙调神经磷酸酶CSTP1抗体Anti-SCP2/NLTP 固携带蛋白2抗体
CTAGE6蛋白抗体Anti-SCP3 联会复合体蛋白3抗体
皮肤T瘤相关抗原4抗体Anti-SCYLV 甘蔗SCYLV抗体
膜蛋白CLDND2抗体Anti-SDF-1/CXCL12 基质衍生因子-1抗体

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产品完善度: 访问次数:606

试剂盒

ATCC细胞

标准品

RNA/DNA提取

生化试剂

菌种

培养基

elisa试剂盒

PCR检测试剂盒

生化检测试剂盒

原代细胞

质粒

荧光PCR试剂盒

细胞生物学试剂

分子试剂

细胞系

细胞培养基

抗体

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详细内容

实验要点:
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
产品属性:
中文名称:革兰氏阳性菌质粒提取试剂盒(1~4mL)
英文名称:Gram+ Bacteria Plasmid extraction kit(1-4mL)
产品规格:50次
产品货号:GOY-F9705
本试剂盒用于从革氏阳性细菌小量制备质粒DNA。本产品基于改良后的碱变性法,先菌体经破壁,然后碱裂解法处理使基因组DNA和质粒DNA均变性,再用酸中和,质粒DNA客户快速复性,而基因组DNA不能快速复性,故可以通过离心去除,除去后含质粒的上清用离心吸附柱吸附质粒DNA,洗去杂质,即可得到纯化的质粒DNA。
试剂盒特点:
快速、步骤少,整个操作在40分钟左右完成。
不需要预平衡离心吸附柱。
通用洗柱液即开即用,不需要用户额外加乙醇。
溶液B中有蓝色染料,便于目测非常关键的碱变性和中和反应两步的溶液混匀状况,保证实验效果。
产量高,一次可以处理1~4mL过夜培养的G+菌液,每毫升过夜培养的G+细菌可以提取到2~5μg/mL(取决于质粒是高拷贝、中拷贝还是低拷贝)。
纯度高,采用本试剂盒提取的质粒OD比值在1.8~2.0之间,可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。
保存条件:
常温运输和保存,RNase A溶液需要-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中,37℃震荡培养12~16小时(摇床转速200-300)。注意:建议使用LB培养基,营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高,过纯化系统处理能力而降低DNA质量。另外,延长培养时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA浓度降低。
用1.5mL离心管收集1~4mL过夜培养饱和菌液,室温12000rpm离心1分钟,弃上清,再短暂离心,吸弃残留液体。
第yi次使用本试剂盒时,先将全部RNase A溶液全部加入到溶液A中,摇匀后再取用,未用完的溶液A放4℃保存。
加入250μL溶液A,用枪头充分吹打使菌体重悬。注意:细胞未充分悬浮会影响后续碱变性,可以使用漩涡振荡器混匀或使用枪头吸头吹打沉淀至完全混匀。
加入大约5mg干粉(用0.1mg精度的分析天平称量),轻柔颠倒混匀后室温放置10分钟破裂细胞壁。
加入250μL溶液B(如果溶液B在低温放置产生沉淀,须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀看到溶液的蓝色变得均匀并且溶液变粘即可(一般需要颠倒4~6次),然后冰上放置不过5分钟。注意:冰上放置不要过5分钟,否则质粒DNA会有碱损伤。千万不要剧烈振荡,否则基因组DNA断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。溶液B用后需要将盖拧紧存放,否则空气中的二氧化碳会进入溶液,形成碳酸,中和溶液B中的碱,降低其效率。如果溶液B颜色不是蓝色,则表示变质,应该弃之不用并且速跟厂家联系。
加入350μL冰上预冷的溶液C,温和反复颠倒直到溶液颜色变成无色(一般需要颠倒混匀4~6次)。混匀后可见白色沉淀物产生,然后冰上放置至少5分钟让质粒DNA复性。
12000rpm离心3分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,部分沉淀物悬浮在上清液中属正常,吸取上清时避开漂浮的沉淀物即可。如果此步的离心在4℃进行,可减轻沉淀物漂浮。
静置2分钟以让质粒DNA与离心吸附柱充分结合,保证静置不少于2分钟十分重要。
室温12000rpm离心1分钟,弃收集管中的废液。
加入500μL的通用洗柱液到离心吸附柱中,室温12000rpm离心1分钟,弃收集管中废液。注意:通用洗柱液中含乙醇,每次用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。
重复上步1次。
室温12000rpm离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如残留乙醇使DNA溶液在电泳上样时不能沉淀到加样孔中)。
将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管(自备)中,加入30~100μL65~80℃预热的DNA洗脱液2.0,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液2.0也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。
室温12000rpm离心1分钟,离心管底溶液即质粒DNA。
由于的吸附柱结合DNA能力较,如果再加适量DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多质粒DNA(相当于第yi次洗脱的20~30%),但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。
操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
转位因子蛋白(TSPO)酶联免疫试剂盒锌标准溶液2.0mg/l,分析标准品,水质分析 三乙三氢氟酸盐 97%十五氟辛酸(约5mmol)[离子对色谱]
转位蛋白(TSN)酶联免疫试剂盒锌 CP,99%叠氮化四丁基铵 95%十五氟辛酸,高等[离子对色谱]
转酮酶(TKT)酶联免疫试剂盒锌粉 AR,99%十二烷基硫酸钠 CP十三氟庚酸,高等[离子对色谱]
转铁蛋白受体2(TFR2)酶联免疫试剂盒锌 AR,99%十二烷基硫酸钠 Ph. Eur,USP,92%十一氟己酸,高等[离子对色谱]
转铁蛋白受体(TFR)酶联免疫试剂盒锌粉 SP十二烷基硫酸钠 AR,92.5-100.5%9,10-二甲氧基蒽-2-磺酸钠盐[离子对色谱]
转铁蛋白(TRF)酶联免疫试剂盒锌粒 SP十二烷基硫酸钠 97%,电泳敌草隆(标准品)
转缩酶(TALDO1)酶联免疫试剂盒对氨基苯乙 98%十二烷基硫酸钠 99.0%,超纯1,4-二氯苯标准溶液
转录因子20(TCF20)酶联免疫试剂盒苯甲酰 98%十二烷基硫酸钠 ACS茜素红
转录衔接因子3(TADA3)酶联免疫试剂盒2,4-二氟溴苯 98%十二烷基硫酸钠 分子生物学,≥98.5% (GC)茜素黄GG
转录衔接因子1(TADA1)酶联免疫试剂盒2-氯-6-氟苯 98%十二烷基硫酸钠 离子对色谱,≥99.0% (GC)茜素黄R
转录激活因子7(ATF7)酶联免疫试剂盒3,5-二氟苯甲 97%橙花 97%铝试剂,玫红三羧酸铵
转录激活因子6(ATF6)酶联免疫试剂盒3-磺酰氯 97%丁位辛内酯 98%铝试剂
转录激活因子5(ATF5)酶联免疫试剂盒苯基乙烯基砜 99%3-苯 99%酸性铬蓝K
转录激活因子4(ATF4)酶联免疫试剂盒对叔丁苯 95%3-苯 ≥98%, FCC酸性品红
转录激活因子1(ATF1)酶联免疫试剂盒甲基烯酸三氟乙酯 包含 100 ppm MEHQ 稳定剂,98%二甲基亚砜 for HPLC, ≥99.7%茜素络合指示剂(IND)
转胶蛋白3(TAGLN3)酶联免疫试剂盒2,2,2-三氟乙 99.5%二氧化钛 CP,98.0%茜素络合指示剂(高纯,98%)
革兰氏阳性菌质粒提取试剂盒(1~4mL)N-Acetylcaprolactam
1888-91-1
中文名: N-乙酰己内酰胺
别 名:
分子式:C8H13NO2
性状:Powder
纯度:98.0%
2-Amino-5-chlorobenzophe
719-59-5
中文名: 2-氨基-5-氯二苯甲酮
别 名:
分子式:C13H10ClNO
性状:Powder
纯度:99.0%

热门标签:革兰氏阳性菌质粒提取试剂盒(1~4mL)

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