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无内毒素质粒DNA小提试剂盒(1.5~5mL)
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详细内容
| 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
| 无内毒素质粒DNA小提试剂盒(1.5~5mL) | Endotoxin-free Plasmid Mini Kit(1.5-5mL) | 50次 | GOY-F9704 |
产品说明书:
| 试剂盒特点: 操作简单,只在经典的柱式质粒DNA提取,增加菌体内毒素清除一步。 去内毒素效果好,处理一次可以去除99%以上的内毒素。 质粒丢失少,产率只比柱式质粒低5~10%,效果好于先提质粒DNA,再用液相内毒素清除剂处理的方法。 DNA可以直接用于转染等实验。 储存条件: 常温运输及保存,有效期一年。RNase A(10mg/mL)需要低温运输和保存。 使用方法: 一、用菌体内毒素清除剂清除E.coli细胞壁上的内毒素。 收集1.5~5mL E.coli饱和菌液,12000rpm离心1分钟,弃上清,得到细菌沉淀。 加入1mL菌体内毒素清除剂温和混匀后10000~12000rpm离心1分钟,弃上清(含内毒素)。 一次洗涤(1~2步)可以去掉90%以上的内毒素,如果需要,可以再重复上述洗涤操作步骤3次,得到的菌体可以直接进入后续的质粒DNA提取步骤。 二、从无内毒素的E.coli中提取质粒DNA 先将全部RNase A溶液全部加入到柱式质粒溶液A中,摇匀后再取用,未用完的柱式质粒溶液A好在4℃保存。 在第3步所得菌液中加入250μL柱式质粒溶液A,用枪头充分吹打使菌体重悬(此步在冰上操作效果更佳)。 注意:细胞未充分悬浮会影响后续操作,可以使用漩涡振荡器帮助混匀或使用Tip吸头吹打沉淀至完全混匀。 加入250μL柱式质粒溶液B(如果溶液B有沉淀,用须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀4~6次,看到溶液变粘即可,然后冰上放置不过4~5分钟。 注意:此步处理不能过5分钟,否则DNA的碱损伤比较严重。同时千万不要剧烈振荡,否则基因组DNA断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。溶液B用后需要将盖拧紧存放,否则空气中的二氧化碳会进入溶液,形成碳酸,中和溶液B中的NaOH,降低其效率)。 加入350μL冰上预冷的柱式质粒溶液C,反复颠倒混匀4~6次,可见白色沉淀物产生,然后冰上放置至少5分钟。 高转速(12000rpm以上)4℃离心5分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。如果此步的离心在室温进行,更容易出现沉淀物漂浮的现象。 静置2分钟以让质粒DNA与吸附柱充分结合,此步十分重要。 室温12000rpm离心1分钟,弃收集管中的废液。 加入500μL的通用洗柱液,室温12000rpm离心1分钟,弃收集管中废液。 注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。 重复上步1次。 室温12000rpm离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管(自备)中,加入30~100μL 65~80℃预热的DNA洗脱液2.0,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液2.0也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。 室温12000rpm离心1分钟,离心管底溶液即质粒DNA。 注:由于的吸附柱结合DNA能力较,如果再加适量DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多质粒DNA(相当于第yi次洗脱的20~30%),但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。 |
低温非冻型保存,不破坏病毒的外壳,方便长途运输。
适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子、阴道拭子等。
可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用拭子取样的病毒。
可以用柱式病毒DNA提取试剂盒或柱式病毒RNA提取试剂盒提取病毒核酸。
试剂本身安全环保无毒。
储存条件:常温,有效期一年。
使用方法:
注意:标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一容器)。
鼻拭子的采集:将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集:用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签浸入步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
直接在一容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封;每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上,连同一容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二容器)内,拧紧盖,在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个二容器内。二容器要承受不少于95 KPa的压力,内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二容器摆放在用运输箱内(或疫苗运输箱),放入冰排,然后以柔软物质填充,并密封,由人(2人)运送,不得邮寄,好使用车。
采集的标本若不能在24小时内送达,则应尽快在⁻⁷0℃以下保存。无⁻⁷0℃条件的,需在4℃冰箱短时间暂存,并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃~-40℃时不稳定,故长期保存好在⁻⁷0℃温度以下进行。
组氨酸丰富钙结合蛋白(HRC)酶联免疫试剂盒N,N-二甲基乙酰 or HPLC, ≥99.8% (GC) N,N-二甲基乙二 98%1-戊烷磺酸钠[离子对色谱]
无内毒素质粒DNA小提试剂盒(1.5~5mL)Acyclovir
操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
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