当前位置: 阿仪网 > 上海谷研实业有限公司 > 产品展示 > 分子试剂 > DNA提取纯化 > 质粒大量提取试剂盒(150~300mL )
质粒大量提取试剂盒(150~300mL )
企业档案
会员类型:旗舰版
已获得阿仪网信誉 等级评定
(0 -40)基础信誉积累,可浏览访问
(41-90)良好信誉积累,可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累,可持续信赖
阿仪网旗舰版会员:10年
最后认证时间:
注册号: 【已认证】
法人代表: 【已认证】
参观次数:6822455
详细内容
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
产品属性:
中文名称:质粒大量提取试剂盒(150~300mL )
英文名称:Plasmid Maxi Kit(150-300mL )
产品规格:10次
产品货号:GOY-F9789
| 试剂盒特点: 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 不需要使用有毒的、等试剂,也不需要乙醇沉淀。快速、方便,从150~300mLLB((Luria-Bertani)培养液中,可快速提取0.5~2mg纯净的高拷贝质粒DNA,提取率达80%以上。 获得的质粒产量高、螺旋比例高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 保存:室温储存12个月不影响使用效果。 保存事项: 第yi次使用时,将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后(终浓度100μg/ml)置于4℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有微量RNA残留,在溶液P1中补加RNase A即可。 环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。 操作步骤:(实验请先阅读注意事项) 提示: ① 第yi次使用请先在漂洗液WB瓶中加入量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! ② 将RNase A全部加入溶液P1中,混匀。每次使用后置于2~8℃保存。 取150~200mL (多不过300mL)过夜培养的菌液,12000×g(约10000rpm),离心1~2分钟,尽可能的倒干上清,收集菌体。 收集过50毫升菌液,可以离心弃上清后,在同一个50mL管内加入更多的菌液,重复步骤1,直到收集到足够的菌体。 用7.5mL溶液P1重悬菌体沉淀,移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。 如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。 加7.5mL的溶液P2,温和地上下翻转6~8次使菌体充分裂解,室温放置4~5分钟。 温和地混合,不要剧烈震荡,以免基因组DNA剪切断裂!所用时间不应过5分钟!以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠。如果很浑浊,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。 加7.5mL溶液N3,立即温和地上下翻转6~8次,充分混匀此时会出现白色絮状沉淀。12000×g离心10~15分钟,小心取上清至新管,避免吸取到漂浮的白色沉淀。 加入溶液N3后应该立即混匀,以免产生SDS的局部沉淀。 向上清中加入0.5体积异丙醇(约10mL)后充分颠倒混匀后分多次(每次不过15mL)转入吸附柱DC中(吸附柱放入收集管中),12000×g离心1分钟,倒掉收集管中的废液。直到所有混合溶液通过此吸附柱。 加入10mL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12000×g离心1分钟,弃掉废液。再加入10mL漂洗液WB,重复漂洗一次。 将吸附柱DC放回空收集管中,高速(好大于12000×g)离心2分钟以干燥基质膜上残留乙醇。 该步骤为彻底去除吸附柱中残留乙醇,残留乙醇抑制下游反应并且严重降低洗脱效率,降低质粒产量。 取出吸附柱DC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加1~2mL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65~70℃水浴中预热可提高产量),室温放置2分钟,12000×g离心1~2分钟。 推荐:为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置1分钟,12000×g离心1~2分钟。洗脱两遍可提高浓度约10%。 洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要质粒浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是需注意体积过小降低质粒洗脱效率,减少质粒产量(小不应少于1mL)。 |
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
肾损伤分子1(Kim1)酶联免疫试剂盒3-氨基烷磺酸 97%海绵钯 99.999%茴香(分析标准品,>99%(GC))
质粒大量提取试剂盒(150~300mL )Phenytoin
热门标签:质粒大量提取试剂盒(150~300mL,)













