当前位置: 阿仪网 > 上海谷研实业有限公司 > 产品展示 > 分子试剂 > DNA提取纯化 > 高纯度质粒大量提取试剂盒(100~300mL)
高纯度质粒大量提取试剂盒(100~300mL)
企业档案
会员类型:旗舰版
已获得阿仪网信誉 等级评定
(0 -40)基础信誉积累,可浏览访问
(41-90)良好信誉积累,可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累,可持续信赖
阿仪网旗舰版会员:10年
最后认证时间:
注册号: 【已认证】
法人代表: 【已认证】
参观次数:6822274
详细内容
| 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
| 高纯度质粒大量提取试剂盒(100~300mL) | HighPure Plasmid Maxi Kit(100-300mL) | 10次 | GOY-F9788 |
产品说明书:
| 试剂盒特点: 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 不需要使用有毒的、等试剂,也不需要乙醇沉淀。快速、方便,从100~300mLLB((Luria-Bertani)培养液中,可快速提取0.5~2mg纯净的高拷贝质粒DNA,提取率达80%以上。 获得的质粒产量高、螺旋比例高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 保存:室温储存12个月不影响使用效果。 保存事项: 第yi次使用时,将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后(终浓度100μg/ml)置于4℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有微量RNA残留,在溶液P1中补加RNase A即可。 环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。 操作步骤:(实验请先阅读注意事项) 提示: ① 第yi次使用请先在漂洗液WB瓶和去蛋白液PE瓶中加入量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! ② 将RNase A全部加入溶液P1中,混匀。每次使用后置于2~8℃保存。 取150~200mL (多不过300mL)过夜培养的菌液,12000×g(约10000rpm),离心1~2分钟,尽可能的倒干上清,收集菌体。 收集过50毫升菌液,可以离心弃上清后,在同一个50mL管内加入更多的菌液,重复步骤1,直到收集到足够的菌体。 用7.5mL溶液P1重悬菌体沉淀,移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。 如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。 加7.5mL的溶液P2,温和地上下翻转6~8次使菌体充分裂解,室温放置4~5分钟。 温和地混合,不要剧烈震荡,以免基因组DNA剪切断裂!所用时间不应过5分钟!以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠。如果很浑浊,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。 加7.5mL溶液N3,立即温和地上下翻转6~8次,充分混匀此时会出现白色絮状沉淀。12000×g离心10~15分钟,小心取上清至新管,避免吸取到漂浮的白色沉淀。 加入溶液N3后应该立即混匀,以免产生SDS的局部沉淀。 向上清中加入0.5体积异丙醇(约10mL)后充分颠倒混匀后分多次(每次不过15mL)转入吸附柱DC中(吸附柱放入收集管中),12000×g离心1分钟,倒掉收集管中的废液。直到所有混合溶液通过此吸附柱。 加入10mL去蛋白液PE(请先检查是否已加入无水乙醇!),12000×g离心1分钟,弃掉废液。 此步骤为了去除痕量核酸酶等杂质,如所用菌株为JM系列、HB101等endA菌 株或野生型菌株,核酸酶含量丰富,应加此步骤;如所用菌株为XL-1 Blue、0和DH5α等缺陷型菌株,核酸酶含量低,则可略过此步骤。 加入10mL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12000×g离心1分钟,弃掉废液。再加入10mL漂洗液WB,重复漂洗一次。 将吸附柱DC放回空收集管中,高速(好大于12000×g)离心2分钟以干燥基质膜上残留乙醇。 该步骤为彻底去除吸附柱中残留乙醇,残留乙醇抑制下游反应并且严重降低洗脱效率,降低质粒产量。 取出吸附柱DC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加1~2mL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65~70℃水浴中预热可提高产量),室温放置2分钟,12000×g离心1~2分钟。 推荐:为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置1分钟,12000×g离心1~2分钟。洗脱两遍可提高浓度约10%。 洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要质粒浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是需注意体积过小降低质粒洗脱效率,减少质粒产量(小不应少于1mL)。 |
低温非冻型保存,不破坏病毒的外壳,方便长途运输。
适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子、阴道拭子等。
可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用拭子取样的病毒。
可以用柱式病毒DNA提取试剂盒或柱式病毒RNA提取试剂盒提取病毒核酸。
试剂本身安全环保无毒。
储存条件:常温,有效期一年。
使用方法:
注意:标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一容器)。
鼻拭子的采集:将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集:用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签浸入步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
直接在一容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封;每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上,连同一容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二容器)内,拧紧盖,在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个二容器内。二容器要承受不少于95 KPa的压力,内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二容器摆放在用运输箱内(或疫苗运输箱),放入冰排,然后以柔软物质填充,并密封,由人(2人)运送,不得邮寄,好使用车。
采集的标本若不能在24小时内送达,则应尽快在⁻⁷0℃以下保存。无⁻⁷0℃条件的,需在4℃冰箱短时间暂存,并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃~-40℃时不稳定,故长期保存好在⁻⁷0℃温度以下进行。
生长关联蛋白43(GAP43)酶联免疫试剂盒1,8-辛二 98%氯金酸 48~50% Au basis甲基环己烷(Standard for GC,≥99.8%(GC))
高纯度质粒大量提取试剂盒(100~300mL)ER-878898
操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
热门标签:高纯度质粒大量提取试剂盒(100~300mL)













