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PCR产物纯化试剂盒
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详细内容
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
产品属性:
中文名称:PCR产物纯化试剂盒
英文名称:PCR product purification kit
产品规格:100次|200次
产品货号:GOY-F9779
| 本试剂盒采用离心吸附柱结合独特的缓冲液系统,从酶切、PCR等反应溶液中纯化DNA段,同时除去蛋白质、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。使用本试剂盒可回收100bp~10kb的DNA段,回收率大于80%(<100bp和>10kb的DNA段回收率为30~50%)。每个吸附柱每次多可吸附的DNA量约为10μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、测序、文库筛选、连接和转化等实验。 保存条件: 本试剂盒在室温(15~25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2~8℃。 注意:当低温贮存时,使用应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10~20分钟,以平衡溶液温度。 操作步骤: 如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 在PCR反应液中直接加入5倍体积的PB液,颠倒混匀后,全部加入到吸附柱CA2中,10000g离心30~60,到掉收集管中的废液,将吸附柱CA2重新放入收集管中。 注: 如果PCR反应体系使用了石蜡油,无需去除,但要使用10倍体积的PB液。 如果反应体系小于50μL,用水补至50μL体系,再加入PB液。 如果体系体积大于700μL,请分次上柱,保证全部溶液均加入到吸附柱中。 向吸附柱CA2中加入700μL漂洗液PW(使用请先检查是否已加入无水乙醇),10000g离心30~60,倒掉废液,将吸附柱重新放入收集管中。 向吸附柱CA2中加入500μL漂洗液PW,10000g离心30~60,倒掉废液。 将离心吸附柱CA2放回收集管中,10000g离心2分钟,尽量除去漂洗液。 注意:此步必不可少!如果漂洗液有残留,将会影响回收效率和DNA质量,进而影响下游实验;离心后将吸附柱盖子打开,室温放置2分钟,这样将有助于彻底挥发残余乙醇。 将吸附柱放到一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟。10000g离心2分钟收集DNA溶液。 注意: 可将洗脱缓冲液EB预热到60~70℃后再加到吸附膜上,这样可以提高洗脱效率。 CA2柱的洗脱体积不应少于20μL,体积过小将会降低回收效率。 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0~8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。 DNA产物-20℃保存。 |
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
丝氨酸肽酶抑制因子Kazal型5(SPINK5)酶联免疫试剂盒氯化甲基汞(II)标准溶液 1000ppm in H2O表白桦脂酸 分析标准品,≥99%三辛(离子对试剂)
PCR产物纯化试剂盒7,8-Dimethoxy-1,3-dihydro-2H-3-benzazepin-2-one
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
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