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RNase A(来源于牛胰腺)
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详细内容
| 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
| RNase A(来源于牛胰腺) | Ribonuclease A from bovine pancreas | 100mg|1g | GOY-F9772 |
产品说明书:
| RNase A一种含4个二硫键的单链多肽,分子量约为13.7kDa(氨基酸序列)。作为一种核糖核酸内切酶(endoribonuclease),特异性降解单链RNA上的胞(C)或(U)残基。具体来说,切割识别的是由某核苷酸上的5’-核糖和相邻的类核苷酸3’-核糖上磷酸基团形成的磷酸二酯键,从而使得2’,3’-环磷酸水解为对应的3’-核苷磷酸(比如,pG-pG-pC-pA-pG经RNase A切割产生pG-pG-pCp和A-PG)。 RNase A切割单链RNA活性高,推荐工作浓度为1-100μg/mL,兼容于各种反应体系。低盐浓度(0-100mM NaCl),可用来切割单链RNA,双链RNA,以及RNA-DNA杂交形成的RNA链。然而,高盐浓度(≥0.3M),RNase A仅特异性切割单链RNA。 RNase A常见的应用在于质粒DNA或基因组DNA制备过程中去除RNA,此制备过程中DNase酶活性的存在与否是需要重视的污染之一,可采用水浴煮沸这种传统方法来灭活DNase活性。另外,本品还可用于RNA酶保护分析、RNA序列分析等分子生物学实验。 贮存液制备: 此为RNase A储存液配制的常用方法之一,也可以根据实验室传统的方法,或者参考文献资料使用其他方法制备储存液(如直接溶于10mM Tris-Cl,pH7.5或者Tris-NaCl溶液)。 1.利用10mM的醋酸钠(pH5.2)制备10mg/mL的RNase A贮存液; 2.100℃加热15min; 3.冷却到室温,加入1/10体积的1M Tris-HCl(pH7.4),调其pH至7.4(如:5mL 10mg/mL的RNase储存液加入500μL 1M Tris-HCl,pH7.4); 4.分装于-20℃冻存,可稳定保存长达2年。 注意:在中性条件下煮沸RNase A溶液,会有RNase沉淀形成;在更低的pH下将其煮沸,如有沉淀可以观察到,可能由于蛋白杂质存在造成。煮沸之后若发现沉淀,可通过高速离心(13,000rpm)去除杂质,然后分装冻存。 |
低温非冻型保存,不破坏病毒的外壳,方便长途运输。
适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子、阴道拭子等。
可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用拭子取样的病毒。
可以用柱式病毒DNA提取试剂盒或柱式病毒RNA提取试剂盒提取病毒核酸。
试剂本身安全环保无毒。
储存条件:常温,有效期一年。
使用方法:
注意:标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一容器)。
鼻拭子的采集:将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集:用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签浸入步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
直接在一容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封;每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上,连同一容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二容器)内,拧紧盖,在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个二容器内。二容器要承受不少于95 KPa的压力,内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二容器摆放在用运输箱内(或疫苗运输箱),放入冰排,然后以柔软物质填充,并密封,由人(2人)运送,不得邮寄,好使用车。
采集的标本若不能在24小时内送达,则应尽快在⁻⁷0℃以下保存。无⁻⁷0℃条件的,需在4℃冰箱短时间暂存,并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃~-40℃时不稳定,故长期保存好在⁻⁷0℃温度以下进行。
碳分解代谢物阻遏4样蛋白(CCRN4L)酶联免疫试剂盒草酸 SP美伐他汀 96%超细高岭土(1250(11um))
RNase A(来源于牛胰腺)Naftifine hydrochloride
操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
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