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高纯度质粒小提试剂盒(1~4mL)
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详细内容
| 本试剂盒通过碱裂解法裂解细胞,新型的硅基质膜一结合DNA,在特定条件下,有效去除内毒素、基因组DNA、RNA、蛋白质等杂质。每次可抽提1~4mL菌液,抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数,细胞培养浓度等因素影响。由本试剂盒所得的质粒可直接用于细胞转染,DNA测序,PCR,基于PCR的突变,体外转录,转化细菌,内切酶消化等下游实验。 保存条件: 室温条件下,可保存12个月,更长时间保存可置于4℃。若溶液产生沉淀,可在室温下放置一段时间,或在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。 使用建议: 如果所提质粒为低拷贝质粒或大10kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用5~10mL过夜培养物,同时按照比例增加P1、P2、P3的用量,洗脱缓冲液EB应在65~70℃水浴预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。其它步骤相同。 注意事项: 溶液P1(Buffer P1)在使用先加入RNase A(全部加入),混匀,4℃保存。 漂洗液PW(Buffer PW)使用应加入48mL无水乙醇。 溶液P2(Buffer P2)低于室温会产生沉淀,使用应检查是否出现浑浊,如有浑浊现象,50℃水浴加热溶解。溶液P2(Buffer P2)使用后请拧紧瓶盖。 溶液P2和P3对人体有刺激性,操作时请小心,不要直接接触。 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。 去蛋白液PE可以有效去除残留的蛋白污染,当宿主菌为endA+ (TG1、BL21、HB101、ET12567、JM系列)等核酸酶含量较高的菌株时,烈推荐使用去蛋白液PE。 操作步骤: 漂洗液PW在使用按照试剂瓶所示体积加入无水乙醇,混合均匀。 取1~4mL过夜培养的菌液,加入离心管中,室温下10000rpm离心1min,收集菌体,并尽可能地吸尽上清。 向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL溶液P1(Buffer P1) (请先检查是否已加入RNase A),使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。 向离心管中加入250μL溶液P2(Buffer P2),轻轻颠倒离心管10次以混合均匀,然后静置5min至溶液粘稠而澄清。 注意:不要剧烈震荡,以免造成所提质粒中基因组DNA污染。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应过5min,以免质粒受到破坏。如果溶液未变得清亮,可能菌体量过多,裂解不彻底,应减少菌体量。向离心管中加入250μL溶液P2,轻轻颠倒离心管混匀6~8次,使菌体充分裂解。 向离心管中加入350μL溶液P3(Buffer P3),立即上下颠倒混匀6~8次,此时出现白色絮状沉淀。室温下13000rpm离心10min。 注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。 小心吸取上清液转移到带有收集管的吸附柱中,室温下13000rpm离心1min,移除收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。 注意:洗脱缓冲液体积不应少于50μL,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0~8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,再次离心收集。 向吸附柱中加入500μL溶液PE(Buffer PE),室温下13000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管。 注:溶液PE(Buffer PE)可以有效去除残留的蛋白污染,当宿主菌为endA+ (TG1、BL21、HB101、ET12567、JM系列)等核酸酶含量较高的菌株时,烈推荐使用Buffer PE。 向吸附柱中加入500μL溶液PW(Buffer PW)(请先检查是否已加入无水乙醇),室温下13000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。 重复操作步骤7。 将吸附柱放入收集管中,打开盖子,室温下13000rpm离心5~10min,目的是将吸附柱中残留的乙醇去除。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验,建议将吸附柱CM开盖,置于室温放置数分钟。 将吸附柱转移至一个的1.5mL离心管中,向吸附膜的中间部位滴加50~100μL洗脱液EB(Buffer EB)或ddH2O,室温放置2min,13000rpm离心1min,收集洗脱液。 |
| 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
| 高纯度质粒小提试剂盒(1~4mL) | Plasmid Miniprep Kit(1-4mL) | 50次 | GOY-F9770 |
使用方法:
注意:标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一容器)。
鼻拭子的采集:将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集:用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签浸入步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
直接在一容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封;每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上,连同一容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二容器)内,拧紧盖,在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个二容器内。二容器要承受不少于95 KPa的压力,内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二容器摆放在用运输箱内(或疫苗运输箱),放入冰排,然后以柔软物质填充,并密封,由人(2人)运送,不得邮寄,好使用车。
采集的标本若不能在24小时内送达,则应尽快在⁻⁷0℃以下保存。无⁻⁷0℃条件的,需在4℃冰箱短时间暂存,并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃~-40℃时不稳定,故长期保存好在⁻⁷0℃温度以下进行。
操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
产品特点:
低温非冻型保存,不破坏病毒的外壳,方便长途运输。
适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子、阴道拭子等。
可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用拭子取样的病毒。
可以用柱式病毒DNA提取试剂盒或柱式病毒RNA提取试剂盒提取病毒核酸。
试剂本身安全环保无毒。
储存条件:常温,有效期一年。
糖磺基转移酶9(CHST9)酶联免疫试剂盒氟化钙 光谱纯氨苄青霉素钠 USP活性炭(药物脱色,200目)
高纯度质粒小提试剂盒(1~4mL)1-Actamido-3,5-dimethyladmantane
热门标签:高纯度质粒小提试剂盒(1~4mL)













