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去内毒素质粒小量提取试剂盒(1~5mL)
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详细内容
| 本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、一地吸附DNA,可大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。研制的内毒素清除剂,可大限度地除去内毒素。从1~5mLLB培养液中,可快速提取5~15μg高纯度质粒DNA,提取率达85~90%。使用本试剂盒提取的质粒DNA纯度高,可直接用于细胞转染等要求较高的实验,以及其他各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。 保存:常温干燥保存,复检期为一年。 注意: 使用请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。溶液P1在使用先将试剂盒中提供的RNase A全部加入,混匀,置于2~8℃保存。如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 操作步骤: 取1~5mL细菌培养物,12000rpm离心1min,吸除上清(菌液浓度较低时可多次离心收集到一个离心管中)。 向留有菌体沉淀的离心管中加入200μL溶液P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。 注意:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。 向离心管中加入200μL溶液P2,温和地上下翻转6~8次使菌体充分裂解。 注意:混匀一定要温和,以免污染细菌基因组DNA,此时菌液应变得清亮粘稠,作用时间不要过5min,以免质粒受到破坏。 向离心管中加入200μL溶液P3,立即温和地上下翻转6~8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm 离心10min,用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中,尽量不要吸出沉淀。 注意:溶液P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。 加入上清1/5体积的冰上预冷的内毒素清除剂,振荡混匀,溶液变浑浊,冰浴2min至溶液变清亮。 37℃水浴5min,不时振荡,溶液又变浑浊。12000rpm室温离心5min,溶液应分为两相,上层水相含质粒DNA,下层油相含内毒素。 将含质粒DNA的上层水相转移至新管,弃下层油相,注意不要吸入油状相。重复步骤5~7三次。 加入600μL的溶液P4,充分混匀后加入吸附柱中,室温放置2min,12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。如果溶液量多可分多次加入。 向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。 向吸附柱中加入600μL漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。 12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。 将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50~200μL经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置2min,12000rpm离心1min。 为了增加质粒的回收效率,可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中,室温放置2min,12000rpm离心1min。 |
| 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
| 去内毒素质粒小量提取试剂盒(1~5mL) | Free Endotoxin Plasmid DNA Extraction Mini Kit(1-5mL) | 50T|100T | GOY-F9762 |
使用方法:
注意:标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一容器)。
鼻拭子的采集:将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集:用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签浸入步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
直接在一容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封;每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上,连同一容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二容器)内,拧紧盖,在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个二容器内。二容器要承受不少于95 KPa的压力,内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二容器摆放在用运输箱内(或疫苗运输箱),放入冰排,然后以柔软物质填充,并密封,由人(2人)运送,不得邮寄,好使用车。
采集的标本若不能在24小时内送达,则应尽快在⁻⁷0℃以下保存。无⁻⁷0℃条件的,需在4℃冰箱短时间暂存,并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃~-40℃时不稳定,故长期保存好在⁻⁷0℃温度以下进行。
操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
产品特点:
低温非冻型保存,不破坏病毒的外壳,方便长途运输。
适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子、阴道拭子等。
可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用拭子取样的病毒。
可以用柱式病毒DNA提取试剂盒或柱式病毒RNA提取试剂盒提取病毒核酸。
试剂本身安全环保无毒。
储存条件:常温,有效期一年。
脱氧核糖核酸酶Ⅱ(DNASEⅡ)酶联免疫试剂盒二(基苯)二氯化钯 Pd 27.7%3-肼基苯甲酸 99%三十六烷(分析标准品,≥99.0%(GC))
去内毒素质粒小量提取试剂盒(1~5mL)Methyl 4'-bromomethyl biphenyl-2-carboxylate
热门标签:去内毒素质粒小量提取试剂盒(1~5mL)













