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DNA纯化回收试剂盒(磁珠法)
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详细内容
| 本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的核酸纯化方法。该产品可用于二代测序建库时DNA的选择性或非选择性回收,以及PCR产物的纯化回收。试剂盒中的MagPure与样品按一定比例混合后,磁珠选择性将核酸吸附。经两步漂洗后,洗脱得到的DNA纯度高,A260/A280的比值在1.7-1.9之间,A260/A230的比值通常在2.0以上。经该试剂盒纯化得到的DNA适用于PCR,Real-Time PCR,测序,southern blotting等实验。 保存条件:2-8℃保存,室温运输。 自备仪器及试剂: 1.磁力架 2.80%乙醇。 3.洗脱液:Buffer EB (10mM Tris-HCl,pH8.0);去离子水(pH在7.0-8.0之间)。 实验准备及重要注意事项: 1.冰冻、离心、声会对MagPure中的磁珠造成不可逆的损害。 2.MagPure中磁珠长期放置后会聚集成团,从而使磁珠表面积减小,降低样品回收得率,使用一定要涡旋振荡彻底混匀磁珠。 3.使用,建议将MagPure涡旋震荡混匀后分装到1.5ml的离心管中,每管分装1ml MagPure。 4.本试剂盒不适用于纯化回收小于100 bp的DNA段,如果要回收小于100 bp的DNA段,建议将MagPure的用量增加到样品体积的4倍。 5.进行DNA的选择性回收时,MagPure对于DNA溶液中的离子浓度较为敏感。不同厂家的二代测序建库试剂盒得到的接头连接后的DNA溶液以及PCR扩增产物中离子浓度不同,所以用MagPure做DNA选择性回收时,试剂用量有所不同。 操作步骤: 1.涡旋振荡MagPure 20,使其彻底混匀为均一溶液。 2.向1.5ml的离心管中加入纯化的DNA溶液。 3.向上一步的离心管中加入2倍样品体积的MagPure,涡旋震荡5后室温静置5分钟。 4.将上一步的离心管放于磁力架上,直至磁珠完全吸附(约需5分钟)。 5.保持离心管固定于磁力架上,彻底弃去溶液,期间避免接触磁珠。 6.继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇。 7.保持离心管固定于磁力架上,待悬起的磁珠完全吸附后彻底弃去乙醇。 8.重复步骤6⁻⁷两次。 9.保持离心管固定于磁力架上静置放置10分钟,使乙醇完全挥发干净。 10.将离心管从磁力架上取下,加入20-100μl EB(自备)或去离子水,涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中后,室温放置5分钟。 11.将离心管放于磁力架上直至磁珠完全吸附(约需5分钟)。 12.将洗脱液转移至一个新的1.5ml离心管中。此时,可弃去磁珠。 |
| 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
| DNA纯化回收试剂盒(磁珠法) | MagBeads DNA Purification Kit | 5ml|50ml | GOY-F9756 |
使用方法:
注意:标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一容器)。
鼻拭子的采集:将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集:用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签浸入步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
直接在一容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封;每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上,连同一容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二容器)内,拧紧盖,在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个二容器内。二容器要承受不少于95 KPa的压力,内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二容器摆放在用运输箱内(或疫苗运输箱),放入冰排,然后以柔软物质填充,并密封,由人(2人)运送,不得邮寄,好使用车。
采集的标本若不能在24小时内送达,则应尽快在⁻⁷0℃以下保存。无⁻⁷0℃条件的,需在4℃冰箱短时间暂存,并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃~-40℃时不稳定,故长期保存好在⁻⁷0℃温度以下进行。
操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
产品特点:
低温非冻型保存,不破坏病毒的外壳,方便长途运输。
适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子、阴道拭子等。
可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用拭子取样的病毒。
可以用柱式病毒DNA提取试剂盒或柱式病毒RNA提取试剂盒提取病毒核酸。
试剂本身安全环保无毒。
储存条件:常温,有效期一年。
微脑磷脂1(MCPH1)酶联免疫试剂盒3-甲氧基羰基苯酸 97%反式-4-甲氧基肉桂酸异辛酯 98%邻氯甲苯(标准品)
DNA纯化回收试剂盒(磁珠法)Mestanolone
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