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唾液DNA收集提取试剂盒
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详细内容
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
产品属性:
中文名称:唾液DNA收集提取试剂盒
英文名称:Saliva DNA collection, preservation,transport and extraction Kit
产品规格:10次|50次
产品货号:GOY-F9737
| 本试剂盒针对唾液样本中的DNA 进行收集、保存、运输、纯化。可提供无疼痛、非侵入性的方法,患者不用忍受抽血的疼痛和感染的风险就能获得高质量、高数量的样品,受测者排斥性低,婴儿和老人都能方便取得DNA样本。收集过程十分简单,受测者将唾液吐至保存液内混匀就完成收集过程。混匀后常温下可运输保存长达一年不会变质。能够节省运送、保存冷藏设备和电力费用。收集的唾液通过几个简单步骤便可提取DNA。抽取的DNA产量高达110μg/2mL唾液。 试剂盒组份(50次): 保存液———————————2ml×50 细胞裂解液—————————50ml 杂质沉淀液—————————85ml DNA溶解液——————————20ml 5ml采集管——————————50个 产品特点: 1.非侵入性采检方式免除了抽血的疼痛和降低了污染风险,并增加了取检的便利性,可由受检者自行取样。 2.仅需2ml的唾液样本,即可取得约110μg的DNA(不同个体产量差异很大)。 3.采样后的检体可稳定地储存于室温环境一年以上。 唾液样品收集步骤: 1. 用清水漱口1~2 次,然后吐掉。 2. 漱口后等候至少5 分钟方可采集唾液,期间不要进食、饮用各种饮料。 3. 将唾液(不是喉咙中痰液)吐到5ml 采集管中,直至2ml 刻度位置。(不可将痰液吐到收集管中,若唾液不足,可做口舌运动,促进分泌。浮在唾液上层的少量泡沫不包括计算在2ml 唾液采集量内,采集过程必须在30 分钟内完成) 4. 将等体积2ml 保存液全部倒在5ml 唾液采集管中,充分颠倒混匀后旋紧盖子。 唾液DNA提取步骤(2ml唾液量举例,可按比例放大缩小每次提取的唾液量): 1. 将保存液/唾液混合物放置于50℃ 水浴中至少1 小时或50℃ 空气孵箱至少2 小时。 2. 转移4ml 混合物(2 ml 唾液加2 ml 保存液)到一个15 ml 或者50 ml 的离心管。 3. 加入1ml 裂解液和10 μl RNase A 溶液(10mg/ml). 高速涡旋振荡10 后室温放置10分钟。 4. 加入1. 7 ml 杂质沉淀液到上述裂解混合物中。 5. 高速涡旋振荡25 ,充分混匀杂质沉淀液和裂解混合物。 6. 2500g离心5分钟。沉淀的杂质和蛋白会在管底形成一个致密的沉淀团。如果蛋白沉淀不太致密,可以冰上放置5分钟,然后重复步骤6。 7. 仔细转移上清(含有DNA)到一个新的15 ml 或者50 ml 的离心管。注意不要触动管底沉淀。加入5ml 异丙醇。(唾液DNA 含量较低时,加入40μl Glycogen 20mg/ml可能提高一些产量) 8. 轻柔颠倒混匀50 次。 9. 2000g 离心3 分钟, 此时一般可在管底看到白色的DNA 沉淀。 10. 倒弃上清, 倒置后在吸水纸上轻敲几下以尽可能吸干。加入5ml 70%乙醇,颠倒几次漂洗DNA 沉淀。 11. 2000g 离心1 分钟, 仔细倒去上清(沉淀很松,注意不要把DNA 沉淀倒掉了)。 12. 倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇,还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇,空气晾干沉淀几分钟(不要干过头,也不要残留乙醇)。 13. 加入250μl -400μl DNA 溶解液重新水化溶解DNA 沉淀,轻弹管壁混匀。 14. 可以放置在65℃温育30-60 分钟(不要过一小时),然后在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA,中间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。 15. DNA 可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃ 或者-80℃。 |
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
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唾液DNA收集提取试剂盒Ethyl2-((tert-butoxycarbonyl)amino)-3-nitrobenzoate
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