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小量质粒快速提取试剂盒(1.5~4.5mL)
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详细内容
| 试剂盒特点: 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 快速、方便,不需要使用有毒的、等试剂,也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 注意事项: 本试剂盒适用菌株为XL-1 Blue和DH5α等核酸酶含量低缺陷型菌株。所用菌株为JM系列、HB101等endA菌株或野生型菌株,核酸酶含量丰富,应购买本公司的高纯度质粒小量快速提取试剂盒。 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C或者类似离心机。 溶液P3中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒,建议接种单菌落于1.5~4.5mL加合适抗生素的LB培养基,过夜培养14~16个小时,可提取出多达20μg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒,应适当加大菌体使用量,使用5~10mL过夜培养物,同时按比例增加P1、P2、P3的用量,其它步骤相同。 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可能为2条或者多条DNA条带,这主要是不同程度的螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本螺旋可以过90%。 质粒DNA确切分子大小,必须酶切线性化后,对比DNA分子量Marker才可以知道。处于环状或者螺旋状态的的质粒,泳动位置不确定,无法通过电泳知道其确切大小。 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在-20℃。质粒DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。 操作步骤:(实验请先阅读注意事项) 提示: ① 第yi次使用请先在漂洗液WB中加入量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! ② 将RNase A全部加入溶液P1中,混匀,每次使用后置于2~8℃保存。 ③ 将溶液P3放在冰上预冷。 取1.5~4.5mL过夜培养的菌液,9000rpm离心30,尽可能的倒干上清,收集菌体。 收集过1.5mL菌液,可以离心弃上清后,在同一个1.5mL管内加入更多的菌液,重复步骤1,直到收集到足够的菌体。 用250μL溶液P1重悬菌体沉淀,涡旋振荡至彻底悬浮。 如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。 加250μL的溶液P2,温和地上下翻转4~7次使菌体充分裂解,室温放置4分钟。 温和地混合,不要剧烈震荡,以免基因组DNA剪切断裂!所用时间不应过5分钟!以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠,如果菌体少,很快清亮粘稠后就可以做下一步,不是一定要准确的5分钟。 加350μL溶液P3,立即温和地上下翻转4~7次,充分混匀时会出现白色絮状沉淀。 冰上静置3~5分钟,13000rpm离心10分钟,小心取上清。 加入溶液P3后应该立即混匀,以免产生SDS的局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。 将上一步所得上清加入吸附柱AC中(吸附柱放入收集管中),13000rpm离心30~60,倒掉收集管中的废液。 加入500μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12000rpm离心30,弃掉废液。 加入500μL漂洗液WB,12000rpm离心30,弃掉废液。 将吸附柱AC放回空收集管中,13000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加50μL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65~70℃水浴中加热效果更好),室温放置2分钟,12000rpm离心1分钟。如果需要较多量质粒,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1分钟。 洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要质粒浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是小体积不应少于30μL,体积过小降低质粒洗脱效率,减少质粒产量。 |
| 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
| 小量质粒快速提取试剂盒(1.5~4.5mL) | Fast Plasmid Mini Kit(1.5-4.5 ml) | 50次|100次|200次 | GOY-F9734 |
使用方法:
注意:标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一容器)。
鼻拭子的采集:将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集:用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签浸入步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
直接在一容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封;每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上,连同一容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二容器)内,拧紧盖,在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个二容器内。二容器要承受不少于95 KPa的压力,内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二容器摆放在用运输箱内(或疫苗运输箱),放入冰排,然后以柔软物质填充,并密封,由人(2人)运送,不得邮寄,好使用车。
采集的标本若不能在24小时内送达,则应尽快在⁻⁷0℃以下保存。无⁻⁷0℃条件的,需在4℃冰箱短时间暂存,并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃~-40℃时不稳定,故长期保存好在⁻⁷0℃温度以下进行。
操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
产品特点:
低温非冻型保存,不破坏病毒的外壳,方便长途运输。
适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子、阴道拭子等。
可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用拭子取样的病毒。
可以用柱式病毒DNA提取试剂盒或柱式病毒RNA提取试剂盒提取病毒核酸。
试剂本身安全环保无毒。
储存条件:常温,有效期一年。
血色病蛋白(HFE)酶联免疫试剂盒蛋白酶K 用于分子生物学,≥30 units/mg protein双(基硅烷基)氨基 0.7M in toluene(15%甲苯溶液)a-硫丹标准溶液(10μg/ml,u=5%)
小量质粒快速提取试剂盒(1.5~4.5mL)1-Ethyl-3-nitrophthalate
热门标签:小量质粒快速提取试剂盒(1.5~4.5mL)













