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凝胶法内毒素半定量试剂盒
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详细内容
低温非冻型保存,不破坏病毒的外壳,方便长途运输。
适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子、阴道拭子等。
可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用拭子取样的病毒。
可以用柱式病毒DNA提取试剂盒或柱式病毒RNA提取试剂盒提取病毒核酸。
试剂本身安全环保无毒。
储存条件:常温,有效期一年。
下列是产品的订购信息!
| 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
| 凝胶法内毒素半定量试剂盒 | Endotoxin semi-quantitative kit(Gel Method) | 10×0.1mL | GOY-F9726 |
产品说明书:
| 本试剂盒又称鲎试剂,为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品。鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下(温度,pH值及无干扰物质),细菌内毒素激活C因子,引起一系列酶促反应,使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。 储存条件:常温运输,阴凉处避光保存,有效期两年。 使用方法: 一、样品溶液的制备 样品的pH值应在6.0–8.0 之间,若出此范围,需用无热原缓冲液或0.1N氢氧化钠、0.1N 盐酸调节。若样品中可能存在鲎实验的干扰物质,见本说明书4.2“样品的干扰实验”。若样品中可能含有导致鲎试剂中G 因子旁路反应的(1,3)β-D-葡聚糖,需选用不会对(1,3)β-D-葡聚糖起反应的特异性鲎试剂。 二:细菌内毒素标准溶液及对照液的准备 2.1细菌内毒素标准溶液(本试剂盒不提供) 取细菌内毒素工作标准品1支,按《细菌内毒素工作标准品使用说明书》配制2λ ,1λ ,0.5λ,及0.25λ的一系列内毒素标准溶液(λ为鲎试剂灵敏度标示值)。备用。 注:鲎试剂灵敏度复核实验见本手册其他常用实验方案。 2.2 阴性对照液:即无内毒素水。 2.3 阳性对照液:即浓度为2λ的内毒素标准溶液。 2.4样品阳性对照液:即添加浓度为2λ内毒素标准的样品溶液。 三:内毒素检测 3.1 鲎试剂的溶解:按标示量(本试剂盒为0.1mL/支)加无内毒素水于鲎试剂中,轻轻振摇使鲎试剂完全溶解。注意不要引起气泡,溶解后的试剂应在10 min内使用(即配即用)。 3.2样品溶液的制备 样品大有效稀释倍数(MVD)的计算: MVD= C?L/λ λ:测试用鲎试剂灵敏度标示值(EU/mL);L:样品细菌内毒素限值;C:样品浓度或样品复溶后所得样品浓度。当L 单位为EU/mL(溶液)时,C的单位为1mL/mL;当L单位为EU/mg或者EU/U时,C的单位为mg/mL或者U/mL。按照计算所得体积,加无内毒素水制备样品溶液。 3.3 各反应管中分别加入0.1mL 阴性对照液,阳性对照液,样品,或样品阳性对照液。 封闭管口,轻轻摇匀,垂直放入37℃的恒温器中温育60分钟±2分钟,温育期间避免振动。 3.4 结果判断 3.4.1 将试管从恒温器中轻轻取出,缓慢倒转180°。若管内的内容物呈坚实凝胶,不变形,不从管壁滑脱为阳性,记录为(+);不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱为阴性,记录为(-)。 3.4.2 只有当阴性对照管结果均为阴性,阳性对照管、样品阳性对照管结果均为阳性,实验方有效,否则无效。若阴性对照管为阳性,提示鲎试剂、无内毒素水或实验器具可能受到污染。若阳性对照管为阴性,提示鲎试剂活性减失、内毒素标准溶液效价降低,鲎试剂的灵敏度或内毒素的效价标示不准确,或内毒素标准溶液的稀释不正确。若样品阳性对照管为阴性,提示反应体系内有干扰因素存在。 |
注意:标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一容器)。
鼻拭子的采集:将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集:用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签浸入步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
直接在一容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封;每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上,连同一容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二容器)内,拧紧盖,在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个二容器内。二容器要承受不少于95 KPa的压力,内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二容器摆放在用运输箱内(或疫苗运输箱),放入冰排,然后以柔软物质填充,并密封,由人(2人)运送,不得邮寄,好使用车。
采集的标本若不能在24小时内送达,则应尽快在⁻⁷0℃以下保存。无⁻⁷0℃条件的,需在4℃冰箱短时间暂存,并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃~-40℃时不稳定,故长期保存好在⁻⁷0℃温度以下进行。
操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
乙脱氢酶2(ADH2)酶联免疫试剂盒氢氧化锂,一水 GR,≥99.0% (T)β-胡萝卜素 96%钒标准溶液(500mg/L,溶剂:水)
凝胶法内毒素半定量试剂盒Methenolone enanthate
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