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上海谷研实业有限公司 主营产品:lisa试剂盒/菌种/ATCC细胞/生化试剂/标准品

第10年

当前位置: 阿仪网 > 上海谷研实业有限公司 > 产品展示 > 分子试剂 > DNA提取纯化 > 无内毒素质粒中提试剂盒(5~15mL)

无内毒素质粒中提试剂盒(5~15mL)

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title型号: 原产地:中国大陆 更新时间:2026/11/5 9:41:24

产品摘要:无内毒素质粒中提试剂盒(5~15mL)正在出售的产品:中心体和纺锤体相关蛋白1抗体Anti-SLC24A5 可溶性载质转运蛋白SLC24A5抗体
9号染色体开放阅读框153抗体Anti-Slc26a5 Slc26a5抗体
4号染色体开放阅读框19抗体Anti-SLC6A19 依赖钠钙交换蛋白6
4号染色体开放阅读框27抗体Anti-SLC16A3/MCT-4 MCT4抗体

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产品完善度: 访问次数:587

试剂盒

ATCC细胞

标准品

RNA/DNA提取

生化试剂

菌种

培养基

elisa试剂盒

PCR检测试剂盒

生化检测试剂盒

原代细胞

质粒

荧光PCR试剂盒

细胞生物学试剂

分子试剂

细胞系

细胞培养基

抗体

企业档案

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旗舰版网址:http://www.elisaguyan.com

详细内容

操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
产品属性:
中文名称:无内毒素质粒中提试剂盒(5~15mL)
英文名称:Endo-Free Plasmid Midi Kit(5~15mL)
产品规格:50次
产品货号:GOY-F9719
本试剂盒通过碱裂解法裂解细胞,新型硅基质膜高效一的结合质粒DNA,同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤柱,有效去除内毒素、蛋白等杂质。由本试剂盒所得质粒纯度高、质量稳定,特别适用于细胞转染,同时也可用于DNA测序,PCR,基于PCR的突变,体外转录,转化细菌,内切酶消化等下游实验。
内毒素是质粒提取中常见的污染物,由于真核细胞对内毒素非常敏感,因此,如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。本试剂盒提供一种简单、快捷、高效提取无内毒素质粒的新方法,提取的质粒大限度去除内毒素,并能有效去除基因组DNA、RNA、蛋白等污染。
保存:室温(15~30℃)
自备试剂:无水乙醇、异丙醇。
实验准备及重要注意事项:
所有组分可在干燥、室温(15~30℃)环境稳定保存1年,更长时间保存可置于2~8℃,加入RNase A的Buffer P1置于2~8℃可稳定保存6个月。
第yi次使用,将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中,混匀,置于2~8℃保存,使用需在室温中放置一段时间,恢复至室温后使用。
第yi次使用应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
使用请先检查Buffer P2和Buffer E3是否出现结晶或沉淀,如有结晶或沉淀现象,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。
注意不要直接接触Buffer P2和Buffer E3,使用后应立即盖紧盖子。
提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
操作步骤:
取5~15mL过夜培养的菌液,加入离心管(自备)中,13000rpm(~16200×g)离心1分钟收集细菌,尽量吸弃全部上清。
向留有菌体沉淀的离心管中加入500μL Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器或涡旋振荡器充分混匀,悬浮细菌沉淀。
注意:如果菌块未彻底混匀,将会影响裂解效果,使提取量和纯度偏低。
向离心管中加入500μL Buffer P2,温和地上下颠倒混匀8~10次,使菌体充分裂解,室温放置3~5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意:温和混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA段。如果溶液未变得清亮,提示可能菌量过大,裂解不彻底,应减少菌体量。
向离心管中加入500μL Buffer E3,立即上下颠倒混匀8~10次,此时出现白色絮状沉淀,室温放置5分钟。13000rpm离心5分钟,吸取上清,将上清加入过滤柱FM中(已装入收集管),13000rpm离心1分钟过滤,将收集管中的滤液转移到离心管(自备)中。
注意:
① Buffer E3加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。
② 吸附柱的大容积为750μL,所以上清液请分两次过滤,并混合于同一自备离心管中。
向滤液中加入450μL异丙醇,上下颠倒混匀。
柱平衡:向已装入收集管的吸附柱中加入200μL Buffer PS,13000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱(已装入收集管)中。
13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:吸附柱的大容积为750μL,所以第5步中所得溶液分多次过柱。
向吸附柱中加入750μL Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇),13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。
将吸附柱重新放回收集管中,13000rpm离心1分钟。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附膜的中间部位加入100~200μL Endo-Free Buffer EB,室温放置2~5分钟,13000rpm离心2分钟。-20℃保存质粒。
注意:
① 为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2~5分钟,13000rpm离心2分钟。Endo-Free Buffer EB在65~70℃水浴预热,适当延长吸附和洗脱的时间,可以增加提取效率。
② 质粒拷贝数较低或>10kb时,Endo-Free Buffer EB在65~70℃水浴预热,可以增加提取效率。
实验要点:
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
甾-O-酰基转移酶2(SOAT2)酶联免疫试剂盒1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐 97%肼黄 85%磷酸氢二铵
甾-O-酰基转移酶1(SOAT1)酶联免疫试剂盒1-丁基-3-甲基咪唑氯盐 97%柯衣定 ARAmberlite?IRA402 强碱型阴离子交换树脂(氯型)
运动因子相关蛋白1(MRP1)酶联免疫试剂盒1-丁基-3-甲基咪唑三氟甲磺酸盐 97%香紫苏内酯 97%Amberlite XAD-1180N 非离子型多孔树脂(粒径0.350 - 0.600 mm)
运动神经元生存蛋白2(SMN2)酶联免疫试剂盒1-丁基-4-甲基吡啶六氟磷酸盐 99%S-联萘酚 99%嘧菌酯(标准品)
孕烷X受体(PXR)酶联免疫试剂盒冠6烯 98%双(二苯基膦) 98%双甲脒标准溶液(10μg/ml,u=4%)
孕酮调节结合因子1(PIBF1)酶联免疫试剂盒冠-8-烯 90%1,2-双(二苯基膦)乙烷 98%双甲脒标准溶液(100μg/ml,u=2%)
孕酮(Pg)酶联免疫试剂盒环己硫 98%1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁 98%标准溶液(0.100mg/ml)
原肌球调节蛋白4(TMOD4)酶联免疫试剂盒4-氯吡啶-2-甲酸甲酯 98%1,5-双(二苯基膦)戊烷 97%标准溶液(100μg/ml,溶剂:甲)
原肌球调节蛋白3(TMOD3)酶联免疫试剂盒1,3-二甲基咪唑鎓二甲基磷酸酯 98.0%1,6-双(二苯基膦基)己烷 97%苯标准溶液(100mg/L,溶剂:水)
原肌球调节蛋白2(TMOD2)酶联免疫试剂盒1-乙基-3-甲基咪唑溴盐 98%1,1'-双(二苯基膦)二茂铁 97%苯标准溶液(1000μg/ml,溶剂:甲)
原肌球调节蛋白1(TMOD1)酶联免疫试剂盒1-乙基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐 98%双(三苯基膦)氯化铵 96%苯标准溶液(0.989 mg/ml,基体:甲)
原肌球蛋白4(TPM4)酶联免疫试剂盒1-乙基-3-甲基咪唑双三氟甲磺酰亚盐 97%1,4-双(二苯膦基)丁烷 96%氨标准溶液(1000μg/ml,溶剂:水)
原肌球蛋白3(TPM3)酶联免疫试剂盒1-乙基-3-甲基咪唑三氟甲磺酸盐 98%(R)-(+)-2,2'-双(二苯膦基)-1,1'-联萘 98%酰嘧磺隆(标准品)
原肌球蛋白2β(TPM2)酶联免疫试剂盒1-乙基-3-甲基咪唑鎓四氟酸盐 97%R-1,1'-联-2-萘酚 99%莠灭净(标准品)
原肌球蛋白1α(TPM1)酶联免疫试剂盒1-乙基-3-甲基氯化咪唑鎓[用于熔盐] 98.0%(S)-(-)-2,2'-双(二苯膦基)-1,1'-联萘 98%草死(标准品)
原钙黏素γA2(PCDHγA2)酶联免疫试剂盒1-乙基-3-甲基咪唑硫酸乙酯 99%1,3-双(二苯膦基)烷 97%正十六烷标准溶液(1000μg/ml,基体:甲)
无内毒素质粒中提试剂盒(5~15mL)2-Amino-9H-fluoren-9-one
3096-57-9
中文名: 2-氨基-9H-芴-9-酮
别 名:
分子式:C13H9NO
性状:Powder
纯度:99.0%
N-Acetyl-5-hydroxytryptamine
1210-83-9
中文名: N-乙酰基-5-羟基色胺
别 名:
分子式:C12H14N2O2
性状:Powder
纯度:99.0%
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。

热门标签:无内毒素质粒中提试剂盒(5~15mL)

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