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柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法)
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详细内容
| 产品特点: 1.处理量大,一次可以处理1-3g 各种真菌组织。 2. 纯度高,OD260/280一般在1.8以上。不含污染和抑制剂,得到的DNA可以不经稀释直接用于酶切、PCR、real-timePCR、multiplex PCR、RAPD、RELP、AFLP、Southern Blotting,microsatellite analysis等各种后续分子生物学实验。 3. 采用玻璃珠法破碎细胞,属于物理方法,远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好,也不容易带入外援真菌DNA。 4.产率一般在10-100μg/g真菌样品。离心吸附柱大吸附量为800μg。 5. DNA段片长度一般在20-40kb左右。 6.适用范围广,适用于度大多数真菌材料,包括酵母(S.cerevisiae、S.pomb、Pichia pastoris)等。 储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。 使用方法: 1. 对菌液:取60-100mL 过夜培养的真菌菌液(OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中,12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。 2. 对菌落:用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落(约1 g),转移到装有20mL 无菌水的干净的塑料离心管中,洗涤下接种环上的菌体。12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。 3. 对孢子材料,一般取1-3g左右,直接加入到离心管中,在材料中加入无菌水20mL,振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。 4.沉淀中加入10mL溶液A和10 克的玻璃珠,涡旋震荡10分钟,可以延长震荡时间。 5. 加入10mL的溶液B,涡旋震荡5分钟,12000rpm离心2分钟,将上清液全部转移到一个50mL的干净的塑料离心管中。 6.在上清中加入3倍体积的溶液C,颠倒数次混匀后,分三次上离心吸附柱,每次上柱后均先室温放置2分钟,然后12000rpm离心1分钟,倒掉穿透液,再第二次上柱,重复上面的操作,直到挂柱步骤完成。 7. 将20mL 通用洗柱液加入离心柱,12000rpm离心1分钟,弃穿透液。 8. 重复上步操作一次。 9. 12000rpm 空甩1分钟去除残留液体。 10. 将离心柱放置在一新的50mL塑料离心管中,加入500μL DNA 洗脱液2.0。 11.室温放置5分钟后12000rpm离心1分钟,管底即为真菌DNA样品,吸取离心管中的DNA溶液重新滴加在吸附柱上,离心洗脱以收集更多的DNA。 12. 所得DNA可立即使用,也可长期保存在-20℃。 13. 注:如离心机转速不能达到12000rpm,可以用大转速离心10-15min 代替12000rpm离心1-2min。 |
| 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
| 柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法) | Fungus DNA Column large-scale extraction kit(Glass bead method) | 4次 | GOY-F9708 |
使用方法:
注意:标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一容器)。
鼻拭子的采集:将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集:用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签浸入步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
直接在一容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封;每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上,连同一容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二容器)内,拧紧盖,在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个二容器内。二容器要承受不少于95 KPa的压力,内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二容器摆放在用运输箱内(或疫苗运输箱),放入冰排,然后以柔软物质填充,并密封,由人(2人)运送,不得邮寄,好使用车。
采集的标本若不能在24小时内送达,则应尽快在⁻⁷0℃以下保存。无⁻⁷0℃条件的,需在4℃冰箱短时间暂存,并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃~-40℃时不稳定,故长期保存好在⁻⁷0℃温度以下进行。
操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
产品特点:
低温非冻型保存,不破坏病毒的外壳,方便长途运输。
适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子、阴道拭子等。
可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用拭子取样的病毒。
可以用柱式病毒DNA提取试剂盒或柱式病毒RNA提取试剂盒提取病毒核酸。
试剂本身安全环保无毒。
储存条件:常温,有效期一年。
轴突蛋白2(NRXN2)酶联免疫试剂盒噻吩-2-硫 97%4-乙氧基苯乙酮 98%砷试剂,DDTC银盐
柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法)4-Allyloxy-2-hydroxybenzophe
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