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一管式病毒DNA-RNA提取试剂盒
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详细内容
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
产品属性:
中文名称:一管式病毒DNA-RNA提取试剂盒
英文名称:One-tube virus RNA-DNA extraction kit
产品规格:50次
产品货号:GOY-F9707
| 试剂盒特点: 1. 回收率高,可以达到90%以上,高于绝大部分基于离心柱的提取方法。可以跟QIAGEN的同类产品媲美。 2. 灵敏度高,通过PCR 检测到病毒DNA的终灵敏度可以达到30 拷贝/mL样品,通过RT-PCR 检测到病毒RNA的终灵敏度可以达到50 拷贝/mL样品。 3.一管式操作,减少了样品污染的可能。 4.一站式套装,除样品外客户不需要准备任何试剂,降低了实验误差。 5. 安全无毒,不需要使用和等有机溶液。 6.处理量大,如果加上病毒离心富集步骤,多可以处理1.5mL液体病毒样品。 7.与PCR、荧光PCR、RT-PCR、荧光RT-PCR等后续反应兼容。 储存条件:常温运输,溶液A4℃保存,溶液B和溶液C室温保存,有效期一年。溶液B和溶液C具有挥发性,使用后需要将瓶盖拧紧。 使用方法: 1. 将0.1-0.2mL液体样品转移到1.5mL 旋盖离心管中。如果需要富集样品中的病毒,可以先将1.5mL液体样品转移到1.5mL 旋盖离心管中,然后4℃ 24,000 g离心60分钟,移弃1.3mL上清液后继续操作下一步的操作。 2. 加入0.6mL溶液A,盖上盖子后振荡3-5。 注意:溶液A用需37℃-65℃水浴融化并充分摇匀后方可使用。 3.室温静置10分钟。 4. 加入0.6mL溶液B,盖上盖子后振荡3-5。 5. 15000g室温离心15分钟。烈建议在离心管管壁上用记号笔做简单标记以区别离心面和向心面。 6.小心移弃上清。注意不要触及管底的DNA和RNA沉淀。 7. 加入1.0mL溶液C,振荡数后15000g室温离心5分钟。注意:将离心管放入离心机时一定要离心面向外。 8. 移弃上清,注意不要触及管底的DNA和RNA沉淀。 9. 短暂离心数,注意:将离心管放入离心机时一定要离心面向外。 10.小心移弃残留上清(残留的溶液C会影响后续反应)。此时离心面的管壁上将有可见的膜状沉淀。 11. 加入100-200μl溶液D,用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁的膜状沉淀,使其溶解。溶解液混浊或有少量不溶物是正常现象。不要离心只取上清使用,因为不溶沉淀物中含有DNA和RNA,必须取混合液使用(哪怕很浑浊)。 12. 直接取适量样品用于PCR或RT-PCR,也可短期保存于-20℃或-80℃。 |
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
转谷氨酰酶6(TGM6)酶联免疫试剂盒甲基纳迪克酸酐 95%4-氯苯酸 97%刚果红(AR)
一管式病毒DNA-RNA提取试剂盒2-Acetyl-5-bromothiophene
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
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