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UNC1999

MCE 国际站：UNC1999

CAS：1431612-23-5

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：UNC1999 是一种 SAM 竞争性、有效和选择性的 EZH2/1 抑制剂，IC₅₀ 分别为 <10 nM 和 45 nM。 IC50 和目标：IC50：<10 nM (EZH2)，45 nM (EZH1)^[1]体外： UNC1999，第一个口服生物可利用抑制剂，对野生型和突变体 EZH2 以及 EZH1 具有高体外效力，EZH1 是一种密切相关的 H3K27 甲基转移酶，在其各自的催化结构域中与 EZH2 具有 96% 的序列同一性。 UNC1999 在广泛的表观遗传和非表观遗传靶标上对 EZH2 和 EZH1 具有高度选择性，与辅因子 SAM 竞争，但与肽底物不竞争。 UNC1999 对 sigma1、sigma2、组胺 H₃ 和 NET 的 K_i 值分别为 4,700 nM、65 nM、300 nM 和 1,500 nM。 NC1999 选择性地杀死 DB 细胞，这是一种具有 EZH2 Y641N 突变的 DLBCL 细胞系。 UNC1999 对 DB 细胞增殖具有浓度和时间依赖性抑制作用 (EC₅₀=633±101 nM (n=3))^[1]。体内单次腹膜内 (IP) 注射 15、50 或 150 mg/kg 的 UNC1999 达到高 C_max（9,700- 11,800 nM)，并在雄性瑞士白化小鼠中表现出剂量线性。 150 和 50 mg/kg IP 剂量导致 UNC1999 的血浆浓度在整个 24 小时内高于其细胞 IC₅₀，而 15 mg/kg IP 剂量导致 UNC1999 的血浆浓度高于其细胞 IC₅₀ 约 12 小时。接下来，我们检查了 UNC1999 是否具有口服生物利用度，并高兴地发现单次 50 mg/kg 口服剂量的 UNC1999 在雄性瑞士白化小鼠中实现了高 C_max (4,700 nM) 和良好的暴露水平。单次口服给药后，UNC1999 的血浆浓度维持在其细胞 IC₅₀ 之上约 20 小时。值得注意的是，所有试验小鼠对包括 150 mg/kg IP 剂量在内的所有剂量都具有良好的耐受性，并且未观察到不良反应^[1]。

体外：UNC1999 是第一种口服生物利用抑制剂，对野生型和突变体 EZH2 以及 EZH1 具有高体外效力，EZH1 是一种密切相关的 H3K27 甲基转移酶，在其各自的催化结构域中与 EZH2 具有 96% 的序列同一性。 UNC1999 在广泛的表观遗传和非表观遗传靶标上对 EZH2 和 EZH1 具有高度选择性，与辅因子 SAM 竞争，但与肽底物不竞争。 UNC1999 对 sigma1、sigma2、组胺 H₃ 和 NET 的 K_i 值分别为 4,700 nM、65 nM、300 nM 和 1,500 nM。 NC1999 选择性地杀死 DB 细胞，这是一种具有 EZH2 Y641N 突变的 DLBCL 细胞系。 UNC1999 对 DB 细胞增殖具有浓度和时间依赖性抑制作用 (EC₅₀=633±101 nM (n=3))^[1]。

体内：单次腹膜内 (IP) 注射 15、50 或 150 mg/kg 的 UNC1999 可实现高 C_max (9,700-11,800 nM)，并在雄性瑞士白化小鼠中表现出剂量线性。 150 和 50 mg/kg IP 剂量导致 UNC1999 的血浆浓度在整个 24 小时内高于其细胞 IC₅₀，而 15 mg/kg IP 剂量导致 UNC1999 的血浆浓度高于其细胞 IC₅₀ 约 12 小时。接下来，我们检查了 UNC1999 是否具有口服生物利用度，并高兴地发现单次 50 mg/kg 口服剂量的 UNC1999 在雄性瑞士白化小鼠中实现了高 C_max (4,700 nM) 和良好的暴露水平。单次口服给药后，UNC1999 的血浆浓度维持在其细胞 IC₅₀ 之上约 20 小时。值得注意的是，所有试验小鼠对包括 150 mg/kg IP 剂量在内的所有剂量都具有良好的耐受性，并且未观察到不良反应^[1]。

激酶试验：EZH2 Y641N 突变体由 BPS Bioscience 生成并进行分析。在 HMT 测定缓冲液中用 10% DMSO 制备 UNC1999 的一系列稀释液，并将 5 μL 稀释液添加到 50 μL 反应中，以便所有反应中 DMSO 的最终浓度为 1%。所有酶促反应均在含有 HMT 测定缓冲液、S-腺苷甲硫氨酸、酶和 UNC1999 的 50 μL 混合物中于室温下重复进行 60 分钟 (EZH2) 和 180 分钟 (EZH2 Y641N)。这些 50 μL 反应在 HMT 基质预涂板的孔中进行。酶促反应后，弃去反应混合物，用TBST缓冲液洗涤每孔3次，并用封闭缓冲液缓慢振荡10分钟。清空孔，并添加 100 μL 稀释的 1°抗体。然后将板在室温下缓慢摇动60分钟。如前所述，将板清空并洗涤 3 次，并在室温下与封闭缓冲液一起振荡 10 分钟。弃去封闭缓冲液后，加入 100 μL 稀释的 2°抗体。然后将板在室温下缓慢摇动30分钟。如前所述，将板清空并洗涤 3 次，并在室温下与封闭缓冲液一起振荡 10 分钟。弃去封闭缓冲液并新鲜制备 HRP 化学发光底物的混合物。将 100 μL 该混合物添加到每个空孔中。立即在 BioTek SynergyTM 2 酶标仪中测量样品的发光[1]。

细胞试验：DB 细胞是一种带有 EZH2 Y641N 突变的弥漫性大 B 细胞淋巴瘤细胞系，获自 ATCC，并在补充有 10% 胎牛血清、抗生素和各种浓度的 UNC1999（0.1、0.2、0.3、 0.4、0.5、1、2、3 和 5 μM) 或 UNC2400 和 DMSO 对照。含有测试化合物或对照的培养基每三天更新一次。使用 TC20 自动细胞计数系统测量至少三个独立实验的活细胞数量。使用酸性提取方案从细胞核中制备总组蛋白。使用 15% SDS-PAGE 分离约 1 微克总组蛋白，转移到 PVDF 膜上，并用组蛋白抗体进行探测。本研究中使用的抗体是针对 EZH2、一般 H3 和 H3K27me3 的抗体[1]。

动物体内实验:小鼠[1] 标准药代动力学研究是使用 Sai Life Sciences 的雄性瑞士白化小鼠进行的。对 UNC1999 的四种剂量（15、50 和 150 mg/kg IP，以及 50 mg/kg PO）进行了评估。每项研究持续24小时。在八个时间点（给药后 0.08、0.25、0.5、1、2、4、8 和 24 小时）每个时间点报告的 UNC1999 血浆浓度是来自 3 只测试动物的平均值。

研究领域：Epigenetics | Autophagy

作用靶点：Histone Methyltransferase | Autophagy

参考文献：

[1]. Konze KD, et al. An Orally Bioavailable Chemical Probe of the Lysine Methyltransferases EZH2 ａnd EZH1. ACS Chem Biol. 2013;8(6):1324-34.