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Ezetimibe | 依泽替米贝

MCE 国际站：Ezetimibe

中文名：依泽替米贝

CAS：163222-33-1

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：Ezetimibe (SCH 58235) 是一种有效的胆固醇吸收抑制剂。 Ezetimibe 是一种 Niemann-Pick C1-like1 (NPC1L1) 抑制剂，也是一种有效的 Nrf2 激活剂。 IC50 和目标：NPC1L1，Nrf2^[1]体外： Ezetimibe (Eze) 是一种有效的 Nrf2 激活剂，不会引起细胞毒性。 Ezetimibe 增强 Nrf2 的反式激活，正如荧光素酶报告基因检测所揭示的那样。 Ezetimibe 还上调 Nrf2 靶基因，包括 Hepa1c1c7 和 MEF 细胞中的 GSTA1、血红素加氧酶-1 (HO-1) 和 Nqo-1。 Ezetimibe 上调 Nrf2+/+ MEF 细胞中的 Nrf2 靶基因，而这种诱导在 Nrf2-/- MEF 细胞中被完全阻断。总之，Ezetimibe 以不依赖 ROS 的方式充当新型 Nrf2 诱导剂^[1]。人 huh7 肝细胞用 Ezetimibe（10 μM，1 小时）预处理，并与棕榈酸（PA，0.5 mM，24 小时）一起孵育以诱导肝脂肪变性。依折麦布治疗可显着降低 PA 升高的甘油三酯 (TG) 水平，这与我们的动物研究一致。 PA 处理导致 ATG5、ATG6 和 ATG7 的 mRNA 表达减少约 20%，而依泽替米贝处理增加了这种表达。此外，依折麦布处理显着增加了 PA 诱导的 LC3 蛋白丰度的降低^[2]。 体内实验：给予依泽替米贝 (Eze) 可减轻喂食甲硫氨酸和胆碱缺乏 (MCD) 饮食的小鼠的肝脏重量。这与依折麦布对肝脂肪变性的有益作用一致。肝脏组织学显示在 MCD 饮食的小鼠中有明显的多个大泡脂肪滴，但依泽替米贝治疗显着减少了这些脂肪滴的数量和大小。此外，Ezetimibe^[1] 显着减轻了喂食 MCD 饮食的小鼠的肝纤维化。 Ezetimibe 治疗的 OLETF 大鼠的血液和肝脏脂质水平，包括 TG、游离脂肪酸 (FFA) 和总胆固醇 (TC) 显着降低。此外，OLETF 大鼠的葡萄糖、胰岛素、HOMA-IR、TG、FFA 和 TC 血清水平高于 LETF 动物，而依泽替米贝可显着降低这些水平。此外，组织学分析表明，与年龄匹配的 LETO 对照组相比，OLETF 对照组大鼠肝细胞中的脂滴更大，依泽替米贝^[2]可使脂滴减弱。

体外：Ezetimibe (Eze) 是一种有效的 Nrf2 激活剂，不会引起细胞毒性。 Ezetimibe 增强 Nrf2 的反式激活，正如荧光素酶报告基因检测所揭示的那样。 Ezetimibe 还上调 Nrf2 靶基因，包括 Hepa1c1c7 和 MEF 细胞中的 GSTA1、血红素加氧酶-1 (HO-1) 和 Nqo-1。 Ezetimibe 上调 Nrf2+/+ MEF 细胞中的 Nrf2 靶基因，而这种诱导在 Nrf2-/- MEF 细胞中被完全阻断。总之，Ezetimibe 以不依赖 ROS 的方式充当新型 Nrf2 诱导剂^[1]。人 huh7 肝细胞用 Ezetimibe（10 μM，1 小时）预处理，并与棕榈酸（PA，0.5 mM，24 小时）一起孵育以诱导肝脂肪变性。依折麦布治疗可显着降低 PA 升高的甘油三酯 (TG) 水平，这与我们的动物研究一致。 PA 处理导致 ATG5、ATG6 和 ATG7 的 mRNA 表达减少约 20%，而依泽替米贝处理增加了这种表达。此外，依折麦布处理显着增加了 PA 诱导的 LC3 蛋白丰度的降低^[2]。

体内：施用依折麦布 (Eze) 可减轻喂食甲硫氨酸和胆碱缺乏 (MCD) 饮食的小鼠的肝脏重量。这与依折麦布对肝脂肪变性的有益作用一致。肝脏组织学显示在 MCD 饮食的小鼠中有明显的多个大泡脂肪滴，但依泽替米贝治疗显着减少了这些脂肪滴的数量和大小。此外，Ezetimibe^[1] 显着减轻了喂食 MCD 饮食的小鼠的肝纤维化。 Ezetimibe 治疗的 OLETF 大鼠的血液和肝脏脂质水平，包括 TG、游离脂肪酸 (FFA) 和总胆固醇 (TC) 显着降低。此外，OLETF 大鼠的葡萄糖、胰岛素、HOMA-IR、TG、FFA 和 TC 血清水平高于 LETF 动物，而依泽替米贝可显着降低这些水平。此外，组织学分析表明，与年龄匹配的 LETO 对照组相比，OLETF 对照组大鼠肝细胞中的脂滴更大，依泽替米贝^[2]可使脂滴减弱。

激酶试验：GST-p62 从大肠杆菌中制备，0.5 μg 纯化的 GST-p62 蛋白用于体外 AMPK 磷酸化测定。使用 γS-ATP 通过非放射性同位素方法测定 AMPK 对 p62 蛋白的磷酸化。 AMPK 复合物是从 HEK293 细胞中免疫纯化的，用 Flag-AMPKβ1 和 HA-AMPKγ1 转染 myc-AMPKα1 野生型 (WT) 或 myc-AMPKα1 激酶死亡突变体 (KD、D157A)。将 AMPK 复合物添加到含有 20 mM HEPES、pH7.4、1 mM EGTA、0.4 mM EDTA、5 mM MgCl2、0.05 mM DTT、0.5 μg GST-p62、0.2 mM AMP 和 1 mM ATPγS 的反应混合物中。反应在37℃下进行30分钟，然后通过添加20mM EDTA终止。为了检测γS标记的p62蛋白，将反应产物用2.5 mM PNBM在室温下烷基化2小时，并使用抗硫代磷酸盐抗体通过蛋白质印迹分析产物[1]。

细胞试验：Huh7 人肝细胞在含有 10% FBS、100 单位/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素的高葡萄糖 DMEM 中于 37°C、95% 空气/5% CO2 气氛中培养。使用或不使用依折麦布（10 μM，1 小时）处理肝细胞，并与棕榈酸（PA，0.5 mM，24 小时）一起孵育[2]。

动物体内实验:小鼠[1]使用十周龄的C57BL/6J雄性小鼠。这些动物被随机分配到三组中的一组（每组 7-10 只小鼠）：正常饮食； MCD饮食，媒介物处理；或 MCD 饮食，依泽替米贝治疗。小鼠自由进食和饮水，温度维持在23±2℃，湿度60%±10%，光照/黑暗周期为12小时。在含依泽替米贝的 MCD 饮食组中，依泽替米贝 10 mg/kg 每日一次，通过口服管饲给药，持续 4 周。食物组和含媒介物的 MCD 饮食组口服相同体积的磷酸盐缓冲盐水 4 周。在治疗期间每周测量一次体重。 4周后，麻醉并处死小鼠；通过心脏穿刺收集血液。收获组织并在液氮中速冻并储存在-70°C，或固定在福尔马林中并包埋在石蜡中。大鼠[2] 使用雄性 OLETF (n=11) 和年龄匹配的 LETO 大鼠 (n=3)，并在特定的无病原体设施中以 12 小时光/暗周期进行实验。 OLETF大鼠是代表迟发性高血糖的模型，并表现出慢性病程、轻度肥胖和糖尿病的临床发作。动物可以不受限制地获取水和食物。在 12 周龄时，将大鼠随机分组并通过胃管饲法用 PBS 或依折麦布（每天 10 毫克/千克）治疗 20 周。研究结束时，将大鼠禁食过夜并用腹膜内 Zoletil/Rompun 麻醉。从腹主动脉收集血液，解剖肝组织，立即冷冻在液氮中，并储存在-80°C直至进一步分析。

研究领域：NF-κB | Autophagy

作用靶点：Keap1-Nrf2 | Autophagy

参考文献：

[1]. Lee DH, et al. Ezetimibe, an NPC1L1 inhibitor, is a potent Nrf2 activator that protects mice from diet-induced nonalcoholic steatohepatitis. Free Radic Biol Med. 2016 Sep 12;99:520-532.[2]. Chang E, et al. Ezetimibe improves hepatic steatosis in relation to autophagy in obese ａnd diabetic rats. World J Gastroenterol. 2015 Jul 7;21(25):7754-63.