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Omaveloxolone

MCE 国际站：Omaveloxolone

CAS：1474034-05-3

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：Omaveloxolone (RTA 408) 是一种抗氧化炎症调节剂 (AIM)，可激活 Nrf2 并抑制一氧化氮 (NO)。 Omaveloxolone 通过抑制 STING 依赖性 NF-κb 信号转导减弱破骨细胞生成。 IC50 和目标：Nrf2^[1]体外评估 Omaveloxolone (RTA 408)、RAW 264.7 小鼠巨噬细胞的抗炎活性细胞用 Omaveloxolone 处理两个小时，然后加入 IFNγ 以刺激 NO 产生并释放到培养基中。 Omaveloxolone 以剂量依赖性方式降低培养基中的 NO 浓度，IC₅₀ 值为 4.4±1.8 nM。 Omaveloxolone 在此测定中的效力与 Bardoxolone methyl 的效力相似，后者的 IC₅₀ 值为 1.9±0.8 nM。 AIM 介导的 NO 抑制需要 Nrf2 激活。在 bardoxolone 甲基处理的 RAW 264.7 细胞中观察到一氧化氮合酶 2 (Nos2) 蛋白水平降低，当 siRNA 降低 Nrf2 mRNA 水平时，该蛋白水平减弱。为评估 Omaveloxolone 的抗癌活性，一组来自不同来源肿瘤的八种人类细胞系用 Omaveloxolone 处理，并在 72 小时后使用磺酰罗丹明 B (SRB) 测定法测量细胞生长。 Omaveloxolone 抑制所有肿瘤细胞系的生长，平均 GI₅₀ 值为 260±74 nM。为确定 Omaveloxolone 是否诱导细胞凋亡，用 Omaveloxolone 和半胱天冬酶底物 DEVD-AFC 处理一组肿瘤细胞 24 小时。 Omaveloxolone 以剂量依赖性方式增加 DEVD-AFC 裂解，表明 Omaveloxolone 治疗会触发癌细胞中的 caspase 激活。在增加 DEVD-AFC 裂解的相同浓度的 Omaveloxolone 下，蛋白质印迹也观察到 Caspase-3 和 caspase-9 裂解^[1]。 体内：为了确定 Omaveloxolone (RTA-408) 是否是骨髓致死剂量的全身照射 (TBI) 后造血急性放射综合征的有效缓解剂，在 TBI 后 24 小时开始，小鼠每天注射 3 次 17.5 mg/kg Omaveloxolone。 Omaveloxolone 治疗导致 100% 的 7 Gy (LD_40/35) TBI 小鼠 (P<0.05) 和 60% 的 7.5 Gy (LD_{100/13< /sub>) TBI 小鼠 (P<0.0001)^[2]。}

体外：为评估 Omaveloxolone (RTA 408) 的抗炎活性，用 Omaveloxolone 处理 RAW 264.7 小鼠巨噬细胞两个小时，然后添加 IFNγ 以刺激 NO 产生并释放到培养基中。 Omaveloxolone 以剂量依赖性方式降低培养基中的 NO 浓度，IC₅₀ 值为 4.4±1.8 nM。 Omaveloxolone 在此测定中的效力与 Bardoxolone methyl 的效力相似，后者的 IC₅₀ 值为 1.9±0.8 nM。 AIM 介导的 NO 抑制需要 Nrf2 激活。在 bardoxolone 甲基处理的 RAW 264.7 细胞中观察到一氧化氮合酶 2 (Nos2) 蛋白水平降低，当 siRNA 降低 Nrf2 mRNA 水平时，该蛋白水平减弱。为评估 Omaveloxolone 的抗癌活性，一组来自不同来源肿瘤的八种人类细胞系用 Omaveloxolone 处理，并在 72 小时后使用磺酰罗丹明 B (SRB) 测定法测量细胞生长。 Omaveloxolone 抑制所有肿瘤细胞系的生长，平均 GI₅₀ 值为 260±74 nM。为确定 Omaveloxolone 是否诱导细胞凋亡，用 Omaveloxolone 和半胱天冬酶底物 DEVD-AFC 处理一组肿瘤细胞 24 小时。 Omaveloxolone 以剂量依赖性方式增加 DEVD-AFC 裂解，表明 Omaveloxolone 治疗会触发癌细胞中的 caspase 激活。在增加 DEVD-AFC 裂解的相同浓度的 Omaveloxolone 下，蛋白质印迹也观察到 Caspase-3 和 caspase-9 裂解^[1]。

体内：为确定 Omaveloxolone (RTA-408) 是否是骨髓致死剂量的全身照射 (TBI) 后造血急性放射综合征的有效缓解剂，小鼠在 TBI 后 24 小时开始每天注射 3 次 17.5 mg/kg Omaveloxolone . Omaveloxolone 治疗导致 100% 的 7 Gy (LD_40/35) TBI 小鼠 (P<0.05) 和 60% 的 7.5 Gy (LD_{100/13< /sub>) TBI 小鼠 (P<0.0001)^[2]。}

细胞试验：MEF、PANC-1、A549、A375、A549/NF-κB-Luc 和 HeLa/NF-κB-Luc 细胞在含 10% FBS 的 Gibco 高糖 DMEM 中培养。 G-361 细胞在含 10% FBS 的 McCoy＇s 5A 培养基中培养。所有其他细胞系均在含有 10% FBS 的 RPMI 1640 培养基中培养。对于生长抑制测定，将细胞以每孔 3×103 个细胞的密度铺在重复的 96 孔培养皿中。第二天，一个板用 Omaveloxolone（200、400、600、800 和 1000 nM）处理，另一个板立即进行磺胺罗丹明 B (SRB) 测定（时间 0）。处理开始 72 小时后，对经过 Omaveloxolone 处理的板中的细胞进行 SRB 测定。计算相对于媒介物处理的细胞的生长百分比。在 GraphPad Prism 中绘制剂量反应曲线并计算 GI50 值。对于细胞计数实验，将 MEF 以每孔 5×104 个细胞铺板于 6 孔培养皿中，并于第二天用 Omaveloxolone 处理。处理后，使用 Vi-CELL XR 细胞分析仪对细胞进行计数。对于克隆形成测定，将野生型（每孔 1×103 个细胞）和 Keap1-/-（每孔 0.5×103 个细胞）MEF 接种在 6 孔培养皿中。六小时后，MEF 接受奥马维洛酮治疗。 7 天后，用 1:7 的乙酸:MeOH 溶液固定菌落，并用 0.5% 结晶紫的 MeOH 溶液染色。对包含 ≥50 个细胞的集落进行计数
[1]。

动物体内实验:小鼠
[2] 对于辐射生存实验，使用野生型C57Bl/6 CD45.2小鼠（6-8周龄）。使用同源野生型C57Bl/6 CD45.1和C57Bl/6 CD45.1/CD45.2杂交宿主小鼠作为移植实验中的受体。用于载体对照 (DMSO) 的奥马维洛酮储备溶液在注射前 1 小时内制备。照射后 24、48 和 72 小时腹腔内给予 Omaveloxolone (17.5 mg/kg) 或 DMSO。使用 250 kVp X 射线机、源至皮肤距离 50 cm 和 2 mm 铜滤光片进行全身照射 (7-8 Gy)。剂量率约为 1.4 Gy/min。

研究领域：NF-κB | Immunology/Inflammation | Apoptosis

作用靶点：Keap1-Nrf2 | STING | Apoptosis

参考文献：
[1]. Probst BL, et al. RTA 408, A Novel Synthetic Triterpenoid with Broad Anticancer ａnd Anti-Inflammatory Activity. PLoS One. 2015 Apr 21;10(4):e0122942.
[2]. Goldman DC, et al. The triterpenoid RTA 408 is a robust mitigator of hematopoietic acute radiation syndrome in mice. Radiat Res. 2015 Mar;183(3):338-44
[3]. Peng Han, et al. RTA-408 Protects Kidney from Ischemia-Reperfusion Injury in Mice via Activating Nrf2 ａnd Downstream GSH Biosynthesis Gene. Oxid Med Cell Longev. 24 December 2017.