黄曲霉毒素M1ELSIA检测试剂盒使用说明书_产品说明_仪器仪表技术文献

黄曲霉毒素M1ELSIA检测试剂盒使用说明书

提供者：上海雅吉生物科技有限公司发布时间：2019/12/13 10:33:37 阅读次数：398次进入该公司店铺

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1 原理及用途
黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测液态奶、奶粉、淡奶油、发酵乳等样品中的黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1，AFM1），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的黄曲霉毒素M1和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗黄曲霉毒素M1抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含黄曲霉毒素M1含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中黄曲霉毒素M1的残留量。
2 技术指标
2.1 试剂盒灵敏度：0.025ppb
2.2 反应模式：25℃，30min～15min。
2.3 样本检测下限：
液态奶…………………………………0.15ppb
奶粉……………………………………0.2ppb
发酵乳、淡奶油………………………0.1ppb
2.4 样本回收率：
组织………………………………………90%±15%
3 试剂盒组成
酶标板………………………………………96孔
标准品（绿盖）：各1ml
0ppb、0.025ppb，0.075ppb，0.225ppb，0.675ppb，2.025ppb
酶标记物(红盖)………………………………6ml
抗体工作液(蓝盖)……………………………6ml
底物液A(白盖)………………………………7ml
底物液B(黑盖)………………………………7ml
终止液(黄盖)…………………………………7ml
20X浓缩洗涤液(白盖)………………………40ml
5X复溶液(黄盖)………………………………50ml
说明书 …………………………………………1份
4 需要的器材和试剂
4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）
4.2 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl
4.3 试剂：乙氰、甲醇、正己烷
5 样本前处理
5.1 样本处理前须知：
实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。实验之前须检查各种实验器具是否干净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。
5.2 配液：
配液1：样品提取液
将甲醇用去离子水按7:3体积比进行稀释，即7份甲醇加3份去离子水。用于奶粉样品的提取，样品提取液可在室温保存一个月。
配液2：复溶液
5×复溶液在使用前按1:4用去离子水稀释。
5.3 样本前处理步骤：
5.3.1 液态奶（含生鲜奶及成品液态奶）处理方法
取液态奶样品直接检测即可。
稀释倍数：1
5.3.2 奶粉处理方法
1）称取5g奶粉于50ml离心管中，加10ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；
2）取1ml上清，加入1.5ml去离子水和2.5ml正己烷，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；
3）去除上层有机相相，取下层水相50μl进行分析。
样本稀释倍数：5倍
5.3.3 奶油/发酵乳处理方法
1）称取取5g样品，加入10ml乙腈，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；
2）取上层液体1ml在50-60℃下氮气吹干；
3）加入用0.5ml正己烷溶解干燥的残渣，再加入1ml复溶液振荡混匀，室温4000转/分离心5分钟；
4）去除上层有机相相，取下层水相50μl进行分析。
样本稀释倍数：3倍
6 酶联免疫实验步骤
将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
实验开始前需：
将20×浓缩洗涤液用去离子水按1:19稀释成工作洗涤液；
6.1 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
6.2 加样反应：加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50µl/孔，再加抗体工作液50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光反应30分钟。
6.3 洗涤：将孔内液体甩干，用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，最后用吸水纸拍干。
6.4 显色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟。
6.7终止：加终止液50µl/孔，轻轻振荡混匀，终止反应。
6.8 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。
7 结果分析
7.1 百分吸光率的计算
标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即

百分吸光度值（%）＝	A	×100%
	A0

A：标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
A0：0ppb标准溶液的平均吸光度值
7.2 标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，对应的标准品浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准品的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）
8 注意事项
8.1 室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
8.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
8.3 混合要均匀，洗板要彻底，在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育过程中，用盖板膜封住微孔板，避免光线照射。
8.5 不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度的降低。不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
8.6 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。
8.7 反应终止液具有腐蚀性，如不慎接触皮肤或衣物请立即用大量自来水冲洗。
9 贮藏及保存期
储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。
保质期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒