1.Origin ａnd General Characteristics
Cell Name A549/DDP
Organism Homo sapiens, human
Age
Tissue
Morphology epithelial
Growth Properties adherent
Descriptions
Biosafety Level
2.Culture Conditions ａnd Handling
Complete Growth Medium RPMI-1640+10% FBS+1-2μg/ml DDP+1% P/S
Subculturing
Remove ａnd discard culture medium. Briefly rinse the cell layer with DPBS
solution to remove all traces of serum that contains trypsin inhibitor.
Add 1.0 to 2.0 mL of Trypsin-EDTA solution to flask ａnd observe cells
under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually within 3
to 5 minutes). Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to
facilitate dispersal.
Add 4.0 to 6.0 mL of complete growth medium ａnd aspirate cells by gently
pipetting. Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture
vessels.
Subcultivation Ratio 1:2-1:3
Medium Renewal 2 to 3 times per week
Cryopreservation
Freeze medium: 50% basal medium+40% FBS+10% DMSO
Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase
Culture Conditions
Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%
Temperature: 37℃
3.Special Features of the Cell Line
Tumorigenic
Effects
Receptor Expression
Antigen Expression
Gene Expression
Applications
收到常温细胞后如何处理？
（细胞培养详细操作步骤请参照邮件附件《细胞培养操作指南》）
1. 首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及
时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2. 用 75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会
有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养 2-4 小
时，以便稳定细胞状态。
3. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用
基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4. 静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依
据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5. 贴壁细胞：若细胞生长密度超过 80%，可正常传代；若未超过 80%，移除细胞培养瓶内培
养基，预留 5ml 左右继续培养，直至细胞密度达 80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧
松。
6. 悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至 50ml 无菌离心管内，1200rpm 离心 5min，
离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入 5ml 培养基吹打、重悬。镜检时，若细
胞密度超过 80%，可将细胞悬液分至 2 个细胞培养瓶内培养，补加培养基至 5ml；若细胞
密度未超过 80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达 80%左右时再进行传代
操作。
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