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Robust Tn5 转座酶

Robustnique

体外转基因操作:

Robust Tn5转座酶可以将含有成对识别序列的双链DNA段（如下图所示）随机整合到宿主细胞的基因组中。整合的过程分为两步：

首先，Robust Tn5转座酶同含有选择标记和识别序列的目标基因片段结合，形成转座体（Transposome）；之后，通过转化的方式将

转座体导入宿主细胞，利用选择标记筛选成功整合目标基因的宿主细胞。

核酸外切酶活性：50 μl反应体系中，20 U本酶与1 μg的pUC19质粒于37°C下温育4小时，DNA的电泳条带无明显变化。

RNase活性：50 μl反应体系中，100 U本酶与250 ng肠杆菌rRNA于37°C温育2小时，经琼脂糖电泳检测，被降解的rRNA小于1%。

1. Zhou, M., Bhasin, A., ａnd Reznikoff, W. S. (1998) J. Mol. Biol. 276, 913-925.

2. Ason, B., Reznikoff, W. S. (2004) J. Mol. Biol. 335, 1213-1225.

质量控制检测:

参考:

应用:

概述：Robust Tn5转座酶是野生型Tn5转座酶的高活性突变体，可以高效的将Tn5转座子插入到目标序列。Robust Tn5转座酶识别Tn5

转座子酶序列的内端（inside end，IE）、外端（outside end，OE）和嵌合端（mosaic end，ME）序列，含有ME序列片段的体外转

座效率高(1)。Robust Tn5转座酶的插入位点具有很高的随机性(2) ，因此被广泛的用于体外转基因（外源基因整合到宿主细胞）和二代

测序建库等领域。

来源：含有Robust Tn5转座酶序列的肠杆菌菌株。

应用：体外转基因（外源基因整合到宿主细胞），二代测序建库。

贮存溶液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 25 °C)，100 mM NaCl，0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100和50%甘油(V/V)。

反应缓冲液：（随酶提供）10x转座反应缓冲液。

单位定义：1单位Robust Tn5转座酶指37°C条件下反应1小时，完全切割1 μg含有识别序列的DNA段所需要的酶量。

重组酶

包装:

浓度:

存储:

25 U

1,000 U/ml

-20°C

该反应体系可根据需要进行放。

1.2 充分混匀，室温（25 °C ）放置30分钟。

1.3 取1-4 μl反应产物进行后续的转化实验，反应产物也可放置于-20°C备用。

2 转化

可以使用的转化方法有电转化，化学转化等。转化后利用选择性标记筛选成功整合目标基因的宿主细胞。

1 转座体（Transposome）的构建*

1.1 准备如下反应体系：

成分

目标基因片段(含选择标记和成对识别序列,100 μg/ml)

Robust Tn5转座酶

100%甘油

体积

2 μl

4 μl

2 μl

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