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免疫组化中抗原修复的方法

提供者:上海谷研实业有限公司   发布时间:2018/4/17 10:30:44  阅读次数:291次  进入该公司店铺

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免疫组化中,组织在福尔马林或者其他固定液的固定过程中,经常会出现蛋白质交联而引起的抗原决定簇封闭,极大的降低抗原的检出率和假阴性现象。此外,临床病理诊断中,免疫组化的应用广泛,因此抗原修复成为了免疫组化极其重要的一环。不同的抗原,采取不同的适宜的抗原修复方法,才能获得的清晰、有效的结果。一般情况下,抗原修复的方法主要有三大类:高温高压修复法、微波加热修复法、酶消化法。那我们又该以何种方法来选择呢?

提示:
抗原修复的强度排序:高温高压修复法(准确度高,条件稳定适合大规模处理,易脱片)> 微波加热修复法(反应强度适中,微波加热不均匀不适宜大规模处理)> 酶消化法;
抗原修复方法应用广度:微波加热修复法(实验室常用)>高温高压修复法(医院常用)> 酶消化法(针对一些特殊组织和靶点效果独特,应用不太广泛);

修复液的效果对比:EDTA(pH=8.0 或 9.0)缓冲液 > 柠檬酸盐缓冲液(pH=6.0)

绝大多数细胞质抗原不做任何修复,一般也能获得相对稳定的染色结果。但采取一些抗原修复方法,可以是抗原决定簇释放的更加充分,进一步提高结果的可靠性和敏感性。所以我们一般采取的是强度适中,反应相对温和的抗原修复方法。推荐使用微波修复法(加热的时间和温度都可以有所调整,可以根据经验或者查阅文献获得)

推荐的方法:微波加热修复法

推荐的修复液:常用柠檬酸盐缓冲液(pH=6.0)

实验过程:微波高温加热 2 min(见微小波动,温度在 90~95 ℃)后,立即转为保温 8 min 待缓慢降至室温,用蒸馏水冲洗 2 次,加入 3% H2O2 8 ~10 min,在用蒸馏水冲洗 2 次,放入 PBS 中并进入下一步骤。(提示:在实际的修复试验中,我们还要控制好修复时间,时间过长容易导致过修复、组织破坏和非特异性反应增强等不利影响)

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Forskolin 40mg 佛司可林标准品 66575-29-9
Foscarnet Related Compound D 0.27ml 膦甲酸相关物质D标准品 1474-78-8
Foscarnet Sodium 50mg 膦甲酸钠标准品 34156-56-4
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