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从神经组织解离到建立原代细胞培养的步骤

提供者:上海谷研实业有限公司   发布时间:2018/9/13 10:31:41  阅读次数:439次  进入该公司店铺

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从神经组织解离到建立原代细胞培养通常需要几天,甚至数周。这个过程不仅繁琐,还很单调。其实还有一种捷径,跟着美天旎三步走,几个小时就能实现从神经组织到体外培养细胞系的产生。这个无缝的流程让研究人员充分利用了宝贵的样品,同时还有宝贵的时间。本文就举个例子,说明一下从组织样品到细胞培养的每一步。

步骤1:神经组织解离


神经组织的解离是第1步。Neural Tissue Dissociation Kit能够将胚胎、新生或成体来源的组织温和解离成单细胞悬液。两步 的酶解过程只需要不到一个小时,就能产生大量下游分析即用的活细胞。解离过程可以手工完成,也能由gentleMACS™ Dissociator来自动完成。


解离过程如下:
将脑组织切成小块,收集在HBSS中,300×g离心2分钟 → 加入预热的酶混合物1,37°C孵育 → 再加入酶混合物2 → 解离(手工解离或自动解离)→ 加到30 μm细胞滤器中,用HBSS洗涤两次


步骤2:髓磷脂碎片的去除+神经细胞的分离


获得了单细胞悬液之后,下一步就是目的细胞的分离。在细胞分离方面,MACS技术无疑是金标准,目前发表的文献已达12000多篇。别急,在细胞分离之前还有一个小插曲。那就是去除对后续免疫标记有干扰的髓磷脂(myelin)。美天旎最近推出的Myelin Removal Beads能够从神经细胞悬液中去除髓磷脂,标记+分离的全过程只需要35分钟。


可能你会觉得,髓磷脂也没什么大不了的,不去除也行吧。美天旎就做过实验,将步骤1得到的细胞悬液分成两组,一组用Myelin Removal Beads处理,一组不处理。然后利用Anti-Prominin-1 MicroBeads分别从两组中分离神经前体细胞。第一组(处理过)的回收率达95%,第二组(未处理)只有80%。瞧,这就是差别。


除了Anti-Prominin-1 MicroBeads,美天旎还提供了多种磁珠,能识别各种免疫球蛋白亚型、亲和标签和荧光基团,而且多种抗体通过间接的磁性标记,也能用于MACS细胞分离。

步骤3:神经细胞培养

分离到了你想要的神经细胞,下一步就是原代培养了。美天旎的MACS Neuro Medium和MACS Supplement B27 PLUS这时就派上用场了。MACS Neuro Medium是化学成分限定的无血清培养基,专门为免疫磁珠分离的神经细胞而优化。

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