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HOLO 人白介素-1β (IL-1β) 检测试剂盒

MCE 国际站：HOLO Human Interleukin-1β (IL-1β) Detection Kit HOLO 人白介素-1β (IL-1β) 检测试剂盒

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-K2116

描述及优势：白细胞介素-1β (IL-1β) 是一种促炎细胞因子，主要由单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞产生。在炎症刺激的作用下，IL-1β 以分子量为 31 kDa 的非活性前体形式合成，并在细胞内积累。IL-1β 在先天性宿主防御中发挥着重要作用，它能够促使靶细胞产生其他促炎细胞因子，并启动针对感染和损伤的急性期反应。IL-1β 水平的升高与多种慢性炎症相关，这也突显了IL-1β 中和抗体在治疗中的潜在价值。MCE HOLO 人白介素-1β (IL-1β) 检测试剂盒是一种基于双抗体夹心的均相发光法定量检测缓冲液、细胞培养上清或血清等生物样本中人 IL-1β 浓度的试剂盒。检测原理为：将 IL-1β特异性抗体 1 （F 结合物标记）、IL-1β特异性抗体 2（生物素标记）、受体微球（F 结合物交联）、待测样本混合孵育，形成双抗体夹心的免疫复合物（抗体 1 - 样本 - 抗体 2）。免疫复合物再与供体磁珠（链霉亲和素交联）共孵育形成发光复合物，实现两种微球间距 200 nm 超出单线态氧的传递距离，受体微球均不产生发射光。 MCE HOLO 人白介素-1β (IL-1β) 检测试剂盒具有如下特点：1. 操作简便：实验简单快速，无需清洗、分离操作，匹配自动化仪器；2. 检测范围宽：动态检测范围 0 - 30,000 pg/mL，检测线性范围 0.32 - 3,000 pg/mL；3. 灵敏度高：样本用量小灵敏度高，特异性强，可实现高通量检测；4. 兼容性：适用于细胞培养上清、缓冲液和血清等天然样本。

操作流程：样品预处理若待测样本检测浓度超过试剂盒检测上限，建议适当稀释后检测。1. 细胞培养上清：细胞培养上清液 1,000 × g 离心 10 min，收集上清液。注：细胞培养液中应至少添加 1% FBS 或 0.1% BSA。2. 血清：按常规方案收集血清样本即可。注：待测样本为血清时，建议选择阴性血清复溶/稀释标准品，其中阴性血清中人 IL-1β 含量应低于检测空白限（空白限浓度见附录）。 标准品准备将 IL-1β 标准品（冻干粉）用 50 µL 去离子水复溶，配制成 0.3 µg/mL 的母液，然后用稀释缓冲液将母液稀释成系列梯度浓度溶液。 检测根据检测类型以下两种方案选一即可。方案一（适用于缓冲液、DMEM 和胎牛血清等大部分常规培养体系中 IL-1β 浓度检测）1. 双抗体预混液制备：20 µL A + 20 µL B + 20 µL C，充分混匀。注：建议双抗体预混液制备后在 1 h 内使用完毕。2. 免疫复合物制备：将 10 µL 标准品/待测样品加入到上述双抗体预混液中，混匀。37°C 孵育 15 min 或室温孵育 60 min。注：孵育过程建议微孔板盖盖或覆膜，防止液体挥发。3. 发光复合物制备：在绿光或避光环境下，将 50 µL D. 供体微球（链霉亲和素交联）加入到上述免疫复合物体系中，37°C 孵育 10 min 或室温孵育 30 min。注：a. 前后两次孵育温度需保持一致。b. D. 供体微球（链霉亲和素交联）对光敏感，建议避光（光照度 c. 孵育过程建议微孔板盖盖或覆膜，防止液体挥发。4. 检测：将发光复合物置于均相化学发光仪或含 Alpha 模块的多功能酶标仪中进行仪器读数 RLU。5. 标准曲线绘制：以 IL-1β 浓度 (pg/mL) 为横坐标，RLU 为纵坐标绘制标准曲线。注：建议每次检测重新绘制标准曲线，标准品每个浓度做 2 - 3 个复孔。6. 计算：根据标准曲线计算出待测样品中 IL-1β 浓度。 方案二（适用于 RPMI 培养体系中 IL-1β 浓度检测）1. 双抗体预混液制备：在绿光或避光环境下，20 µL A + 20 µL B + 20 µL D，充分混匀，室温孵育 30 min。注：a. D. 供体微球（链霉亲和素交联）对光敏感，建议避光（光照度 b. 孵育过程建议微孔板盖盖或覆膜，防止液体挥发。2. 免疫复合物制备：在绿光或避光环境下，将 10 µL 标准品/待测样品加入到上述预混液中，37°C 孵育 15 min。注：孵育过程建议微孔板盖盖或覆膜，防止液体挥发。3. 发光复合物制备：在绿光或避光环境下，加入 20 µL C.受体微球到上述预混液中，37°C 孵育 10 min。注：孵育过程建议微孔板盖盖或覆膜，防止液体挥发。4. 检测：将发光复合物置于均相化学发光仪或含 Alpha 模块的多功能酶标仪中进行仪器读数 RLU。5. 标准曲线绘制：以 IL-1β 浓度 (pg/mL) 为横坐标，RLU 为纵坐标绘制标准曲线。注：建议每次检测重新绘制标准曲线，标准品每个浓度做 2 - 3 个复孔。6. 根据标准曲线计算出待测样品中 IL-1β 浓度。

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