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Vari Fluor 荧光染色试剂盒

MCE 国际站：Vari Fluor 7-colour Multiple Fluorescent Staining Kit ((For mouse samples)

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-KD1009

存储条件：4°C ，1 年注意避光。

产品活性：MCE 提供多种多重荧光检测试剂盒，最高可对六种指标进行同时检测，最大程度满足客户实验需求。

描述及优势：多重荧光免疫组化技术 (Multiplex immunohistochemical) 也称作酪氨酸信号放大 (TSA, Tyramide dignal amplification) 技术。是一类利用辣根过氧化酶 (HRP) 对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。该方法基于酪胺信号放大的多重顺次免疫染色技术，可以在细胞或组织样本原位上检测多个目标靶点，通过这些靶点的组合和位置关系的研究，进而阐明其相互作用机理。 MCE 提供多种多重荧光检测试剂盒，最高可对六种指标进行同时检测，最大程度满足客户实验需求。

操作流程：染料配制染料使用方法：TSA 荧光染料工作液 = VF 荧光染料 + TSA buffer；推荐荧光染料和 TSA buffer 的稀释比为 1：200；稀释比例可以根据具体情况灵活调整优化，最佳范围为 1:50-- 1:400；一般建议若一抗孵育时间常温 1 h-3 h 内，建议稀释比例 1:50 - 1:200, 若一抗孵育时间 4℃ 过夜（12 h 或以上），建议稀释比例 1:200- 1:400 或更高。实验步骤样本准备 1）石蜡切片：依次将切片放入二甲苯 Ⅰ 15 min，二甲苯 Ⅱ 15 min-无水乙醇 Ⅰ 5 min-无水乙醇 Ⅱ 5 min-95 % 乙醇 5 min-85 % 乙醇 5 min⁻⁷5 % 乙醇 5 min，蒸馏水洗。 2）冰冻切片：冰冻切片固定 10-30 min，PBS 洗 5 min，重复3次，滴加 0.3% triton-X100 破膜液通透 20min，PBS 洗 5 min，重复3次。 3）细胞爬片或者细胞涂片：细胞样本固定10-30 min ，PBS 洗 5 min 重复 3 次，滴加 0.3% triton-X 100 破膜液通透 20 min，PBS 洗 5 min，重复 3 次。注： 1）组织所包含细胞数应大于 1000 个。 2）切片厚度建议为 4 µm 左右，使用防脱玻片，建议玻片在固定后一周内制备。 3）福尔马林固定的蜡块或玻片，大块组织或TMA,封蜡不能有明显的破损。 4）组织应当用10 % 中性福尔马林固定，正常固定时间为 18-24 h。 5）玻片样本，组织需要紧贴玻片，避免褶皱，玻片不能有破损、划伤或污渍。抗原修复 2.1方式一：柠檬酸修复 1）使用微波炉将载玻片放入 pH 6.0 ，10 mM 柠檬酸钠缓冲液中煮沸。 2）在低火温度下保持 10 min（注意补液）。 3）将载玻片放置在台上，冷却到室温，持续 30 min。 2.2 方式二：EDTA修复 1）使用一个微波炉，并将载玻片放入 1 mM EDTA 中煮沸，pH 8.0。 2）在低火下保持 15 min。无需冷却。 3 阻断内源性过氧化物酶 1）用 dH2O 清洗切片三次，每次 5 min。 2）切片放入 3 % 过氧化氢水溶液中，孵育 10 min。 3）用 dH2 O清洗两次，每次 5 min。 4）用 TBST 清洗 5 min。 4 非特异性靶点封闭 1）去除玻片上残存洗液。 2）用组化笔圈出玻片上的样本区域，滴加封闭液，浸没样本。 3）室温保湿震荡10 min。 5 一抗孵育 1）去除玻片上残留液。 2）用移液枪滴加一抗工作液，浸没样本区域。 3）室温保湿震荡孵育 1 h。注：孵育时间根据不同抗体进行调整，在湿盒操作避免干燥。 4）用TBST 清洗 3 min，重复一次。 6 HRP 二抗孵育 1) 去除玻片上残留液。 2) 用移液枪滴加 HRP 二抗工作液，浸没样本。 3) 室温震荡孵育 10 min。 4) 用 TBST 清洗 3 min，重复一次。 7 TSA 荧光染料反应液反应 1) 去除玻片上残留液。 2) 用 1×Tyramide Amplification Buffer 以 1 : 200 稀释 TSA 染料，配制成工作液。每个样品准备 100 µL 染色液。注：染色液在室温下避光保存，最长可保存 24 h。 3）在玻片上滴加 100 uL染色工作液,浸没样本，室温保湿震荡孵育 10 min。 4）在室温下用 TBST 洗涤 3 次，每次 5 min。 5）微波修复（同上），室温自然冷却。 6) 灭菌水洗片1次，1* TBST buffer浸片 2 min。 7) 染色结束，封片或继续染色（从步骤 2 开始）注：

品牌介绍:
• MCE (MedChemExpress) 拥有200 多种全球独家化合物库，我们致力于为全球科研客户提供前沿最全的高品质小分子活性化合物；
• 50,000 多种高选择性抑制剂、激动剂涉及各热门信号通路及疾病领域；
• 产品种类涵盖各种重组蛋白，多肽，常用试剂盒，更有 PROTAC、ADC 等特色产品，广泛应用于新药研发、生命科学等科研项目；
• 提供虚拟筛选，离子通道筛选，代谢组学分析检测分析，药物筛选等专业技术服务；
• 设有专业的实验中心和严格的质控、验证体系；
• 提供 LC/MS、NMR、HPLC、手性分析、元素分析等各项质检报告，确保产品的高纯度、高品质；
• 产品的生物活性多经各国客户实验验证；
• Nature, Cell, Science 等多种顶级期刊及制药专利收录了MCE客户的科研成果；
• 专业团队跟踪最新的制药及生命科学研究进展，为您提供全球最新的活性化合物；
• 与世界各大制药公司及知名科研机构建立了长期的合作。