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血清/血浆外泌体提取纯化试剂盒（升级款）

MCE 国际站：Exosome Isolation ａnd Purification Plus Kit (From Plasma ａnd Serum)

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-K1063A

描述及优势：外泌体 (Exosome) 是由细胞分泌的包含 RNA 和蛋白质的小囊泡 (30 - 150 nm)，广泛存在于血液、唾液、尿液及乳汁等体液中。外泌体具有细胞信使功能，参与细胞通讯。MCE 血清/血浆外泌体提取纯化试剂盒（升级款）使用独特的分离技术，可快速高效地从血清、血浆中分离纯化外泌体，且获得的外泌体纯度和活性较高，可用于电镜分析、NTA 粒径分析、 Western Blot、 qPCR、细胞生物学和动物实验等。

操作流程：样本预处理1. 实验准备1) 离心机使用前 4°C 预冷 10 min。2) 将缓冲液 A1 置于 4°C 冰箱中融化后取适量缓冲液 A1 于冰上备用。注：首次解冻缓冲液 A1 后建议进行适当分装，尽量避免反复冻融。2. 取样：冻存样本 25°C 水浴解冻后置于冰上待用；新鲜样本直接置于冰上待用。3. 样品分装：将样品分装为 500 µL/管，不足 500 µL 则用 PBS (1×) 补齐。4. 离心除杂1) 4°C 3,000 g (6,200 rpm) 离心 10 min，收集上清。注：若观察到沉淀较多，可重复以上离心操作直至无明显沉淀。2) 4°C 12,000 g (12,400 rpm) 离心 10 min，收集上清。注：以上离心操作基于小型离心机 (有效半径 ~ 7 cm) 和 ≤ 2 mL 离心管条件进行。体系较大建议分管离心，下同。 去除杂蛋白1. 每 500 µL 上述预处理的样本中加入 400 µL 预冷的缓冲液 A1，立即将离心管盖盖紧，涡旋振荡 30 s 使其充分混匀。2. 4°C 12,000 g (12,400 rpm) 离心 20 min，收集上清。 外泌体提取1. 每 500 µL 上述样本中加入 120 µL 缓冲液 B1，立即将离心管盖盖紧，涡旋振荡 1 min 使其充分混匀。4°C 静置孵育 30 min。注：延长以上静置孵育时间可提高外泌体得率，但不可超过 24 h。2. 4°C 12,000 g (12,400 rpm) 离心 15 min，收集沉淀。尽可能吸尽上清，沉淀中富含外泌体颗粒。注：沉淀可能不易观察，可在离心前标记沉淀位置。3. 4°C 12,000 g (12,400 rpm) 离心 2 min，收集沉淀。4. 取适量 PBS (1×) 重悬外泌体沉淀使其充分溶解。注：建议每 500 µL 样本对应外泌体沉淀用 200 µL PBS 重悬。5. 4°C 12,000 g (12,400 rpm) 离心 2 min，收集上清。上清中富含外泌体颗粒。注：若观察到沉淀较多，可重复以上离心操作直至无明显沉淀。 外泌体纯化与保存1. 外泌体纯化将收集得到的外泌体粗品转移至外泌体纯化过滤器上室中，4°C 3,000 g (6,200 rpm) 离心 10 min，收集过滤器管底液体，即得纯化的外泌体。2. 外泌体保存将纯化的外泌体分装后于 -80°C 保存备用，避免反复冻融。

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