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组织外泌体提取纯化试剂盒

MCE 国际站：Exosome Isolation ａnd Purification Kit (From Tissue)

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-K1067

描述及优势：外泌体 (Exosome) 是由细胞分泌的包含 RNA 和蛋白质的小囊泡 (30 - 150 nm)，广泛存在于血液、唾液、尿液及乳汁等体液中。外泌体具有细胞信使功能，参与细胞通讯。MCE 组织外泌体提取纯化试剂盒使用独特的分离技术，可快速高效地从多种组织（如脑、心、肺、肝、肌肉、淋巴结、胸腺、胚胎、肿瘤等）中分离纯化外泌体，且获得的外泌体纯度和活性较高，可用于电镜分析、NTA 粒径分析、 Western Blot、qPCR、细胞生物学和动物实验等。

操作流程：样本预处理1. 实验准备1) 离心机使用前 4°C 预冷 10 min。2) 将缓冲液 A2 置于 4°C 冰箱中融化后取适量于冰上备用。注：首次解冻缓冲液 A2 后建议进行适当分装，尽量避免反复冻融。2. 组织预处理：在消毒器皿（置于冰上）中将组织剪切成1 mm3 - 3 mm3 的组织碎块（剪切得越小越好）并转移至离心管中，加入 ≥ 10 倍体积的 PBS (1×) 充分混匀。300 g (2,000 rpm) 离心 10 min，弃上清。注：以上离心操作基于小型离心机 (有效半径 ~ 7 cm) 和 ≤ 2 mL 离心管条件进行。体系较大建议分管离心，下同。3. 组织消化：按每 0.1 g 组织加入 1 mL 缓冲液 A2 的比例，将组织碎块与缓冲液 A2 混匀在 2 mL 离心管中，置于横向恒温摇床 37°C 80 rpm 孵育 20 min。注：也可选择 37°C 水浴锅孵育 30 min，建议每隔 5 min 手动混匀一次。4. 离心除杂1) 8,000 g (10,100 rpm) 离心 10 min，收集上清。2) 4°C 12,000 g (12,400 rpm) 离心 10 min，收集上清。 外泌体提取1. 按每 1 mL 上述预处理的样本加入 250 µL 缓冲液 B2 的比例，将预处理得到的上清与缓冲液 B2 混匀，立即将离心管盖盖紧，涡旋振荡 1 min 使其充分混匀。4°C 静置孵育 1 h 以上。注：a. 延长以上静置孵育时间可提高外泌体得率，但不可超过 24 h。b. 缓冲液 B2 需室温保存，温度过低可能出现白色结晶或沉淀切难以复溶（需要高温水浴复溶），少量沉淀一般不影响外泌体提取效果。2. 4°C 12,000 g (12,400 rpm) 离心 30 min，收集沉淀。尽可能吸尽上清，沉淀中富含外泌体颗粒。3. 4°C 12,000 g (12,400 rpm) 离心 2 min，收集沉淀。4. 取适量 PBS (1×) 重悬外泌体沉淀使其充分溶解。注：建议每 0.1 g 组织样本对应外泌体沉淀用 200 µL PBS 重悬。5. 4°C 12,000 g (12,400 rpm) 离心 2 min，收集上清。上清中富含外泌体颗粒。注：若观察到沉淀较多，可重复以上离心操作直至无明显沉淀。 外泌体纯化与保存1. 外泌体纯化将收集得到的外泌体粗品转移至外泌体纯化过滤器上室中，4°C 3,000 g (6,200 rpm) 离心 10 min，收集过滤器管底液体，即得纯化的外泌体。注：a. 若离芯厚发现过滤器上柱中仍有较多液体残留，可将其转移至新过滤器中重复离心收集以回收外泌体。b. 一般情况下，0.1 g 组织（如心肌组织）外泌体得率为 100 - 200 µg。2. 外泌体保存将纯化的外泌体分装后于 -80°C 保存备用，避免反复冻融。

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