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小鼠中性粒细胞阴性分选试剂盒

MCE 国际站：Mouse Neutrophil Negative Selection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-K0350

存储条件：4℃，2 年 磁珠禁止冻结

产品活性：MCE 小鼠中性粒细胞阴性分选试剂盒可从小鼠骨髓或其他组织样本的单细胞悬液中分离出中性粒细胞。

描述及优势：MCE 小鼠中性粒细胞阴性分选试剂盒可从小鼠骨髓或其他组织样本的单细胞悬液中分离出中性粒细胞。原理为生物素 (Biotin) 标记的单克隆抗体对非目标细胞（非 CD11b+ Ly-6G+ 细胞）进行标记，再通过链霉亲和素 (Streptavidin) 标记的磁珠对非目标细胞进行去除，从而达到小鼠中性粒细胞分选的目的。 本试剂盒操作简单，各成分对细胞均无毒性，且可实现高纯度细胞分离的目的，适用于小鼠骨髓、外周血或脾脏中的中性粒细胞分选。分离的细胞可用于下游应用，如流式细胞术、细胞培养、Western blot 分析、免疫沉淀、报告基因检测或 DNA/RNA 提取等。 MCE 小鼠中性粒细胞阴性分选试剂盒具有如下优点： 1. 简单快速：30 min 即可分选得到目的细胞； 2. 无需分离柱：使用磁性分离器即可实现目的细胞的快速分离； 3. 高纯度：分选细胞纯度可达 95%； 4. 高活性：分选后细胞活性高且功能良好可用于下游实验。

操作流程：细胞样本准备 1. 红细胞裂解：将获取的小鼠骨髓、脾脏或外周血样品置于离心管中，加入红细胞裂解液（MCE 货号：HY-K3010）进行红细胞裂解。 注：a. 建议根据样本类型调整红细胞裂解液的用量及裂解时间。一般小鼠外周血红细胞裂解需要更长时间。 b. 少量红细胞残留不会影响后续分选及细胞纯度。 c. 小鼠骨髓样本可省略红细胞裂解直接进行分选，但分选后由于红细胞残留中性粒细胞纯度会有所下降 ( 2. 制备单细胞悬液：裂解后用 PBS 重悬细胞，细胞悬液用 70 µm 细胞筛网过滤后，计数。计数完成后，500 × g 离心 5 min，弃上清。 注：此步骤目的是除去细胞悬液中的组织和细胞团块，以免影响后续细胞分选纯度。 3. 用分选缓冲液重悬细胞，调整细胞密度为 1×108 个/mL. 细胞分选 1. 磁珠准备：充分重悬链霉亲和素磁珠，取 20 µL 至 1.5 mL EP 管中，加入 1 mL 分选缓冲液，10,000 × g 离心 1 min，弃上清。重复洗涤磁珠 1 - 2 次，加 20 µL 分选缓冲液重悬磁珠。 注：最后磁珠重悬分选缓冲液的用量与初始吸取磁珠体积需一致。 2. 抗体标记：取 100 µL 细胞悬液 (1 × 107 个细胞）加入流式管底部，再加入 2 µL 生物素化抗体预混液，混匀后 4°C 孵育 10 min。 注：a. 细胞悬液直接加入流式管底部，避免沿管壁加入。 b. 如果分选更多细胞，可按比例增加生物素化抗体预混液的用量。 3. 细胞洗涤：细胞-抗体孵育完成后，用分选缓冲液洗涤细胞 1 次，补加分选缓冲液至 1.5 mL，500 g 离心 5min。 注：若处理细胞量较大，可换用 15 mL 离心管，分选缓冲液补加至 5 - 10 mL。 4. 磁珠标记：离心完成后用 100 µL 分选缓冲液重悬细胞，加入 20 µL 清洗过的磁珠，混匀后 4°C 孵育 10 min。 注：如果分选更多细胞，则按比例增加磁珠用量。例如分选 5 × 107 个细胞，在 500 µL 细胞悬液中加入 10 µL 抗体预混液和 100 µL 磁珠。如果分选少于 1 × 107 个细胞，则将细胞悬液体积补至 100 µL，加入 2 µL 抗体预混液和 20 µL 磁珠。 5. 洗涤：孵育完成后，在流式管中加入 2.5 mL 分选缓冲液，用移液器轻柔吹吸混匀（避免剧烈振荡或者上下颠倒混匀）。 6. 分选：将含有细胞的分选流式管置于磁性分离器上，磁性分离 5 min。 7. 收集细胞：将细胞悬液轻柔倒入一个无菌离心管中（倾倒过程中流式管不可脱离磁性分离器），此细胞悬液中即包含纯化的小鼠中性粒细胞，500 × g 离心 5 min。离心后弃上清，收集细胞。 8. 根据实验需要洗涤细胞，将细胞重悬于所需缓冲液或培养基中，即可用于后续分子生物学或细胞生物学实验。

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