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Cross-linked dextran G 25

MCE 国际站：Cross-linked dextran G 25

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-148140

CAS：9041-35-4

存储条件：Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month

运输条件：美国大陆的室温；其他地方可能有所不同。

产品活性：Cross-linked dextran G 25 是一种葡聚糖层析介质。Cross-linked dextran G 25 分离范围为 1-5 kD (球形蛋白)，可用于多肽的分离以及大分子蛋白质的脱盐和缓冲液替换。

生物活性：Sephadex G 25 是一种葡聚糖层析介质。 Sephadex G-25 可分离 1 至 5 kD（球形蛋白），可用于多肽的分离以及大分子蛋白的脱盐和缓冲液置换^[1]。 In Vitro: Guidelines（以下是我们推荐的方案。此方案仅提供一个指南，应根据您的具体需求进行修改）。
1. < b>溶胀： 干燥的橡胶颗粒需要进行第一次溶胀。置于过量去离子水中并在室温下膨胀 3 小时，或在 90°C 水浴中膨胀 1 小时。 （溶胀过程中禁止使用磁力搅拌，以免破坏微球）
2. 装柱：
（1）准备初始缓冲液（平衡溶液）和洗脱缓冲液根据待分离样品的性质而定。在蛋白质等蛋白质脱盐的情况下，凝胶层析中一般建议只使用一种低盐浓度的缓冲液进行上样、平衡和洗脱。例如50 mM Tris-盐酸或接近中性的PBS缓冲液；如果是多肽的分离，可适当加入0.15 M NaCl，以屏蔽靶标与凝胶的相互作用；如果是buffer exchange，根据需要选择目标buffer。
(2) 吸干凝胶，用初始buffer（凝胶：buffer = 3:1）配制匀浆，脱气。
(3) 垂直固定柱子，用水或缓冲液润湿柱子底端，保持液面一段时间。
(4) 用玻璃棒引导匀浆，沿柱子方向一次性倒入柱子中柱内壁，让凝胶在柱内自由沉降，加水封柱，沉降过夜。
(5) 连接柱顶活动柱头，开启蠕动泵，用操作流速让buffer流过5倍柱体积，再用1.5倍操作流速流过5倍柱体积，调节接头头，尽量靠近。最后，用2-3个柱体积的缓冲液平衡柱子。
注意：所有操作过程中不能引入气泡，以确保凝胶的均匀性。
3. < b>平衡：用平衡缓冲液在操作流速下平衡色谱柱，观察检测器的变化，直至电导率、pH等参数保持不变。
4. 上样： 切换开关阀进行上样，上样量根据样品的性质和层析介质的量来选择。一般来说，上样量不超过柱床体积的25%。样品用平衡液配制，用0.45 µm微孔滤膜过滤预处理。
5. 洗脱：换用洗脱缓冲液恒流洗脱，出峰后，
6. 再生：用0.2 mol/L NaOH或非离子洗涤剂洗涤2倍柱体积；然后用3-5倍柱体积的去离子水冲洗。
7. 贮藏 使用后，用20%乙醇更换流动相，4℃冰箱保存。
8、为获得更好的脱盐效果，建议不同粒径的柱高保持在：粗颗粒30cm及以上，中颗粒20cm及以上，10cm及以上细颗粒，5cm及以上为超细颗粒，粒径越小，分辨率越高，流速越慢。
9、加样量应根据实验确定。一般最大上样量不超过柱床体积的30%，10-20%为最佳上样量。

体外：指导原则（以下是我们推荐的方案，该方案只提供指导，应根据您的具体需求进行修改）。 1.溶胀：干燥的橡胶颗粒需要首次溶胀，放入过量的去离子水中，室温溶胀3h，或90℃水浴溶胀1h。（溶胀过程中禁止使用磁力搅拌，以免破碎微球） 2.装柱： （1）根据待分离样品的性质，配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。对于蛋白质等需要脱盐的蛋白质，一般建议凝胶层析中上样、平衡和洗脱只使用一种盐浓度较低的缓冲液，例如50 mM Tris-盐酸或接近中性的PBS缓冲液；如果是多肽的分离，可以适当加入0.15 M NaCl，以屏蔽靶标与凝胶的相互作用；如果是缓冲液交换，则根据需要选择目标缓冲液。（2）吸干凝胶，用初始缓冲液（凝胶：缓冲液=3：1）配制匀浆，脱气。（3）垂直固定柱子，用水或缓冲液润湿底端，保持液面一段时间。（4）用玻棒引导匀浆液沿柱子内壁一次性倒入柱子中，让凝胶在柱子中自由沉降，用水封柱，沉淀过夜。（5）在柱子顶部连接可移动的柱头，开启蠕动泵，用操作流速让缓冲液流过5倍柱体积，再用1.5倍操作流速流过5倍柱体积，并调节适配器头尽量接近。最后用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。注意：所有操作过程中不能带入气泡，以保证凝胶的均匀性。 3.平衡：用平衡缓冲液在操作流速下平衡色谱柱，观察检测器的变化，直至电导率、pH等参数不变为止。4.上样：切换切换阀上样，上样量根据样品性质、色谱介质用量选择，一般来说上样量不超过柱床体积的25%。用平衡液制备样品，经0.45µm微孔膜过滤预处理。5.洗脱：切换至洗脱缓冲液恒速洗脱，达峰后，至基线平衡。6.再生：用0.2mol/L NaOH或非离子洗涤剂冲洗2倍柱体积；再用去离子水冲洗3-5倍柱体积。7.贮存：使用后，用20%乙醇更换流动相，4℃冰箱保存。 8.为获得更好的脱盐效果，建议不同粒径的柱高保持在：粗颗粒30cm及以上，中颗粒20cm及以上，细颗粒10cm及以上，超细颗粒5cm及以上，且粒径越小，分辨率越高，流速越慢。9.样品加入量应根据实验确定。一般最大上样量不超过柱床体积的30%，10-20%为最佳上样量。MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

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参考文献：

[1]. Saul A, et al. A rapid method of concentrating proteins in small volumes with high recovery using Sephadex G-25. Anal Biochem. 1984 May 1;138(2):451-3.