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Annexin V-EGFP/PI 细胞凋亡检测试剂盒

MCE 国际站：Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-K1074

中文名称：Annexin V-EGFP/PI 细胞凋亡检测试剂盒

存储条件：-20°C，1年避光保存，避免反复冻融

产品活性：Annexin V-EGFP/PI 细胞凋亡检测试剂盒可方便、快捷的检测细胞凋亡。经 Annexin V-EGFP 和 PI 联合染色后，正常细胞基本无荧光（Annexin V-/PI-），早期凋亡细胞呈绿色荧光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡细胞及坏死细胞则呈绿色和红色荧光（Annexin V+/PI+）。与 FITC 相比，EGFP 的绿色荧光更强，不易淬灭，稳定性更高。

生物活性：MCE Annexin V-EGFP/PI 细胞凋亡检测试剂盒采用 EGFP 标记的重组人 Annexin PS）位于细胞膜内侧；细胞凋亡早期，PS 会外翻到细胞膜外侧。 Annexin V 常作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。Annexin V 经 EGFP 标记后可发绿色荧光，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生与 FITC 相比，EGFP 的绿色荧光更强，不易淬灭，稳定性更高。此外，本试剂盒中的碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 染色液是一种不能穿透细胞膜的红色荧光染料，可对凋亡晚期细胞及坏死细胞染色。经 Annexin V-EGFP 和 PI 联合染色后，正常细胞基本无荧光（Annexin V-/PI 早期凋亡细胞呈绿色荧光 (Annexin V+/PI-)，晚期凋亡细胞及坏死细胞则呈绿色和红色荧光 (Annexin V+/PI+)。

操作流程：1. 收集细胞：收集 1-5 × 105 个细胞。 悬浮细胞：1000 g 离心 5 min，弃去上清。加入 1 mL 预冷的 PBS 轻轻重悬细胞沉淀，1000 g 离心 5 min，弃去上清，保留细胞沉淀。 贴壁细胞：小心吸取细胞培养液保存备用。加入 PBS 洗涤后，加入适量胰酶消化液（尽量不含 EDTA，以免影响 Annexin V 和 PS 的结合）消化细胞。加入前面收集的培养液，轻轻吹打细胞，制成单细胞悬液，1000 g 离心 5 min，弃去上清。加入 1 mL 预冷的 PBS 轻轻重悬细胞沉淀，1000 g 离心 5 min，弃去上清，保留细胞沉淀。 注：建议胰酶消化液不含 EDTA。 2. 加入 195 μL Binding Buffer，轻轻重悬细胞。 3. 加入 5 μL Annexin V-EGFP，轻轻混匀。 4. 加入 10 μL PI Stain，轻轻混匀。 5. 室温下避光孵育 10-20 min。 注：孵育过程中可轻轻颠倒数次以加强染色效果。 6. 检测与分析 6.1 流式细胞仪检测：用流式细胞仪检测荧光强度。 注：_x000D_a. 流式检测时，EGFP 最大激发波长为 488 nm，最大发射波长为 507 nm，在 FL1 通道检测；PI-DNA 最大激发波长为 535 nm，最大发射波长为 617 nm，在 FL2 或FL3 通道检测。 b. 建议设置三组对照：未染色组、PI 单染组及 Annexin V-EGFP 单染组。 6.2 荧光显微镜检测：1000 g 离心 5 min，弃去上清，加入 50-100 μL Binding Buffer 轻轻重悬细胞沉淀，涂片后用荧光显微镜检测荧光强度。

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