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胶原酶III型
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详细内容
中文名称:胶原酶III型
英文名称:Collagenase III
产品规格:100mg
发货周期:1~3天
本品为III型胶原酶,≥100 U/mg solid,常用于乳腺细胞和胎儿细胞的制备。
本品来源于溶组织梭菌(Clostridium histolyticum),是一种酶粗提物,不仅含有胶原酶(更准确的称法为梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)),能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分别能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白,多糖和脂质,使得本品非常适用于组织消化。
胶原酶(Collagenase)是一种蛋白酶,一种肽链内切酶,能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列(该序列高频率出现在胶原中,很少发现于其他蛋白中)并切割该序列中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽,但胶原酶是唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶,这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。
目商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异,分为四种类型:胶原酶I型,II型,III型和IV型,在应用上有所偏向:
1)胶原酶I(Type I Collagenase):含有比较均匀的各种酶活力(包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性)。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备;
2)胶原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备;
3)胶原酶III(Type III Collagenase):含有较低的蛋白酶活性,常用于乳腺细胞的制备;
4)胶原酶IV(Type IV Collagenase):含有低胰酶活性,通常用于胰岛细胞的制备,或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。
分子量:68-130 kDa
激活剂:Ca2+、Zn2+
抑制剂:EDTA, EGTA,Cysteine, histidine, 2-mercaptoethanol, o-phenanthroline DTT, Hg2+, Pb2+, Cd2+, Cu2+, Zn2+, Not inhibited by DFP or serum
活力单位:在37℃,pH7.5 的条件下,5h内水解胶原产生相当于1μM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。
储存条件:4℃避光,有效期两年
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
间二酰 99%人芳香烃受体(AhR)免疫试剂盒化CD19抗体Phospho-cdc25A (Ser292) 化分裂周期蛋白25抗体
对二酰 99%人泛素结合酶E2D2(UBC4/5的同源物,酵母)(UBE2D2)免疫试剂盒着丝粒蛋白APhospho-cdc25A (Ser178) 化分裂周期蛋白25抗体
磺酰 97%人泛素结合酶E2D1(UBC4/ 5的同源物,酵母)(UBE2D1)免疫试剂盒化着丝粒蛋白APhospho-cdc25A (Ser177) 化分裂周期蛋白25抗体
愈创木酚 >99.0%(GC)人泛素激活酶(E1/UBAE)免疫试剂盒化二氢嘧啶酶样2抗体Phospho-cdc25A (Ser124) 化分裂周期蛋白25抗体
愈创木酚 CP,98.0%人泛素蛋白(Ub)免疫试剂盒克拉拉蛋白抗体Phospho-cdc2 (Tyr15) 化周期素依赖激酶2抗体
对溴 99%人反状腺原氨(rT3)免疫试剂盒B淋巴粘附分子CD22抗体Phospho-cdc2 (Thr161) 化周期素依赖激酶2抗体
溴 99.5%人法尼二法尼转移酶1(FDFT1)免疫试剂盒组织蛋白酶G抗体Phospho-cdc2 (Thr14) 化周期素依赖激酶2抗体
溴 98%人法尼X受体(FXR)免疫试剂盒激分子B7-1蛋白抗体Phospho-cdc2 (Ser39) 化周期素依赖激酶2抗体
二溴 99%人二酰甘油(DAG/DG)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框145抗体phospho-CD32B(Tyr291) 化CD32B抗体
二溴 分析标准品,99.5%人二肽肽酶Ⅳ(DPPⅣ)免疫试剂盒20号染色体开放阅读框186抗体phospho-CD244(Tyr271) 化CD244抗体
二溴标准溶液2000μg/ml,溶剂:人二氢嘧啶脱氢酶[NADP+](DPYD)免疫试剂盒角蛋白7抗体Phospho-CD19(Tyr531) 化CD19抗体
二 CP人二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)免疫试剂盒间隙连接蛋白26抗体phospho-CD19(Ser227) 化CD19抗体
二 99%人二氢嘧啶酶样2(DPYSL2)免疫试剂盒膜辅蛋白抗体Phospho-CD18 (Ser756/Thr758/759) 化整合素β2抗体
二 AR,98%人二羟赖正己氨(DHLNL)免疫试剂盒F肌动蛋白α1亚抗体phospho-CD151/MER2(Ser30) 化CD151抗体
二 ≥99%, FCC人二腺苷(ADP)免疫试剂盒CD8抗体phospho-CBL2(Tyr774) 化原癌蛋白CBL2抗体
胶原酶III型磷酸化β-连环蛋白/β-连环素/β链接素抗体Human AMPK gamma 1 ELISA Kit红霉素
磷酸化β-连环蛋白/β-连环素/β链接素抗体Human AGR3 ELISA Kit葡聚糖T110
βA3/A1-crystallin蛋白抗体Human AGS3 ELISA Kit人H-ras ELISA试剂盒,
γS-crystallin蛋白抗体Human AREG(Amphiregulin) ELISA Kit人Ⅳ型胶原(ColⅣ)ELISA试剂盒,Col Ⅳ ELISA kit
1号染色体开放阅读框85抗体Human AHSA1 ELISA Kit人羟脯氨酸糖蛋白(HRGP)ELISA试剂盒,HRGP ELISA
1号染色体开放阅读框87抗体Human AK3L1 ELISA Kit人激肽释放酶1(KLK 1)ELISA试剂盒, KLK 1 ELISA
1号染色体开放阅读框95抗体Human AMPK gamma 1 ELISA Kit小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA试剂盒,
补体C1S链多肽抗体Human AMPK beta 2 ELISA Kit小鼠游离脂肪酸(FFA)ELISA试剂盒,
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