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胶原酶I型
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详细内容
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中文名称:胶原酶I型
英文名称:Collagenase I
产品规格:100mg
发货周期:1~3天
本品为I型胶原酶,≥250 U/mg solid,可用于上皮、肝、肺、脂肪和肾上腺等组织和细胞的解离。
本品来源于溶组织梭菌(Clostridium histolyticum),是一种酶粗提物,不仅含有胶原酶(更准确的称法为梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)),能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分别能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白,多糖和脂质,使得本品非常适用于组织消化。
胶原酶(Collagenase)是一种蛋白酶,一种肽链内切酶,能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列(该序列高频率出现在胶原中,很少发现于其他蛋白中)并切割该序列中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽,但胶原酶是唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶,这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。
目商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异,分为四种类型:胶原酶I型,II型,III型和IV型,在应用上有所偏向:
1)胶原酶I(Type I Collagenase):含有比较均匀的各种酶活力(包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性)。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备;
2)胶原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备;
3)胶原酶III(Type III Collagenase):含有较低的蛋白酶活性,常用于乳腺细胞的制备;
4)胶原酶IV(Type IV Collagenase):含有低胰酶活性,通常用于胰岛细胞的制备,或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。
酶活力单位定义
在37℃,pH7.5 的条件下,5h内水解胶原产生相当于1μM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。
储存条件:4℃,有效期两年
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
二异氨锂溶液 2.0 M in heptane/ THF/ ethylbenzene人分泌性白蛋白酶抑制因子(SLPI)免疫试剂盒转录调节因子C/EBP β抗体phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr198) 化P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂抗体
溴化镁 20% THF溶液人分泌型免疫球蛋白A(SIgA)免疫试剂盒CREB结合蛋白抗体phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr187) 化P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂抗体
1,10-菲啰啉-5,6-二酮 97%人分泌型脂酶A2(sPLA2)免疫试剂盒嗜粒趋化蛋白抗体phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr157) 化P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂抗体
双(硅烷)氨 1 M in THF (约22%含量)人分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)免疫试剂盒黑色素瘤粘附分子CD146抗体phospho-CDKN1B/P27kip1 (Ser178) 化P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂抗体
双(硅烷)氨 0.7M in toluene(15%溶液)人分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)免疫试剂盒化周期素E抗体phospho-CDKN1B/P27kip1 (Ser10) 化P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂
化镁 2.0M 四溶液人分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)免疫试剂盒α-s2酪蛋白抗体phospho-CDKN1A/P21 (Thr57) 化p21蛋白抗体
双(硅烷)氨钠 98%人分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)免疫试剂盒组织蛋白酶B抗体phospho-CDKN1A/P21 (Thr145) 化p21蛋白抗体
双(硅烷)氨钠 1.0 M 四溶液(21%)人分泌粒蛋白1(嗜铬粒蛋白B)(CHGB/SCG1)免疫试剂盒CXCL10趋化因子10/干扰素诱导蛋白10抗体phospho-CDKN1A/P21 (Ser146) 化p21蛋白抗体
双(硅烷)氨钠 2.0 M 四溶液(40%)人分泌成分(SC)免疫试剂盒CXC趋化因子14抗体phospho-CDKN1A/P21 (Ser130) 化p21蛋白抗体
酚钠 90%人肺炎支原体抗体(MP-Ab)免疫试剂盒酪蛋白抗体Phospho-CDK9 (Thr29) 化周期素依赖性激酶9抗体
2,3,4,6-四苄-D-吡喃葡萄糖 97%人肺炎衣原体抗原(Cpn)免疫试剂盒补体4结合蛋白Phospho-CDK9 (Thr186) 化周期素依赖性激酶9抗体
3-氨酚 98%人肺炎衣原体抗体IgM(Cpn-IgM)免疫试剂盒NK抑制性受体3DL1抗体phospho-CDK7 (Thr170) 化周期素依赖性激酶7抗体
3-氨酚 分析标准品,99%人肺炎衣原体抗体IgA(Cpn-IgA)免疫试剂盒9号染色体开放阅读框116抗体phospho-CDK6 (Tyr24) 化周期素依赖性激酶6抗体
四羟硫 75%水溶液人肺炎衣原体抗体(Cpn-Ab)免疫试剂盒化原癌因c-Jun抗体phospho-CDK6 (Tyr13) 化周期素依赖性激酶6抗体
钠 CP,98.0%人肺炎衣原体(Cpn)抗体(IgG)免疫试剂盒化CREB-1抗体phospho-CDK5(Tyr15) 化周期素依赖性激酶5抗体
胶原酶I型7号染色体开放阅读框64抗体Human ARMER ELISA Kit小鼠脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA试剂盒,
8号染色体开放阅读框12抗体Human APPBP1 ELISA Kit大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA试剂盒,
8号染色体开放阅读框31抗体Human ARNTL(Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator-like protein 1) ELISA Kit大鼠球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒,
8号染色体开放阅读框33抗体Human APPL2(DCC-Interacting Protein 13-Beta) ELISA Kit大鼠血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒,
Ⅱ型胶原蛋白抗体Human ARAF ELISA Kit大鼠列腺素E1(PGE1)ELISA试剂盒,
软骨蛋白1抗体Human ARCN1 ELISA Kit大鼠β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA试剂盒,
颅面部发育蛋白1抗体Human APPL2(DCC-Interacting Protein 13-Beta) ELISA Kit豚鼠肝生长因子(HGF)ELISA试剂盒,
肥大羧肽酶A3抗体Human ARNTL(Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator-like protein 1) ELISA Kit山羊磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA试剂盒,
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
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